pet28a为载体的质粒转化后在kana平板上长出单克隆，挑菌摇菌长不出来怎么回事

你用多大体积摇的？一般先用3ml摇过夜吧？

确定没有放错kana？还有你转速有点太快了，降到250，摇过夜试试

可以增加一下菌的含量，考虑菌量偏小。

可能是平板有问题，也就是说平板上长的单克隆不是需要的抗性；可以用新鲜平板划线，如果能长，再从新平板上挑单克隆摇菌；如果不长，说明原来平板上的单克隆不对。

这种情况可能是由以下几个方面导致的：

质粒有突变：有时候，质粒在构建过程中会产生不同程度的突变，从而影响到细菌对抗生素的敏感性。因此，您可以考虑对质粒进行测序，看是否存在突变。

抗性基因表达不足：可能是您的宿主菌对抗生素的敏感性很高，也可能是您构建的质粒抗性基因的表达水平不够高。您可以尝试使用更高浓度的抗生素来筛选，或者使用更高效的抗性基因。

培养条件不够适宜：摇菌的时间、温度、摇动速度等条件都可能影响到细菌的生长和繁殖。您可以尝试在不同的条件下摇菌，看是否会对结果产生影响。

建议您可以从这几个方面入手进行优化，并在优化过程中不断尝试和调整。此外，如果实验条件允许，可以考虑使用其它筛选方法，例如PCR筛选等。