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载体为什么总是在开头部分出问题

相关实验:质粒构建技术

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dxy_gawu3mo4

一段基因,连到pgex-4t-3载体上,用pgex-3丿和r引物测序,测序结果比对,总是在基因和切开的载体连接处的5’端出问题,碱基增添或丢失,求助原因以及解决办法

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3 个回答

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bamboopiggy

有帮助

1.检查一下你引物是否有问题(对于同源重组的做法)2.检查一下你的酶切位点是否为单一酶切位点

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loveliufudan

有帮助

这种情况可能是由多种原因导致的:

1.合成问题:合成基因时可能出现错误,如碱基增添或丢失,导致合成的基因与模板不同。

2.连接问题:在将基因连接到载体上时,可能出现错误,如碱基增添或丢失,导致载体与基因的连接不稳定。

3.酶切问题:酶切可能不均匀,导致在切开的载体的5°端出现问题。

为了解决这个问题,建议以下解决办法:

1.重复合成和连接:重复基因合成和连接,确保没有错误。

2.检查合成过程:检查合成基因和连接载体的所有步骤,确保正确。

3.重复酶切:重复酶切,以确保切开的载体是均匀的。

4.完整测序:完整测序,确保准确识别错误。

5.检查实验条件:检查实验条件,确保实验是适当的。

通过这些解决办法,可以确定原因并解决问题。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

更换载体类型或者检查你的碱基适配度

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