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一段基因,连到pgex-4t-3载体上,用pgex-3丿和r引物测序,测序结果比对,总是在基因和切开的载体连接处的5’端出问题,碱基增添或丢失,求助原因以及解决办法
bamboopiggy
1.检查一下你引物是否有问题(对于同源重组的做法)2.检查一下你的酶切位点是否为单一酶切位点
loveliufudan
这种情况可能是由多种原因导致的:
1.合成问题:合成基因时可能出现错误,如碱基增添或丢失,导致合成的基因与模板不同。
2.连接问题:在将基因连接到载体上时,可能出现错误,如碱基增添或丢失,导致载体与基因的连接不稳定。
3.酶切问题:酶切可能不均匀,导致在切开的载体的5°端出现问题。
为了解决这个问题,建议以下解决办法:
1.重复合成和连接:重复基因合成和连接,确保没有错误。
2.检查合成过程:检查合成基因和连接载体的所有步骤,确保正确。
3.重复酶切:重复酶切,以确保切开的载体是均匀的。
4.完整测序:完整测序,确保准确识别错误。
5.检查实验条件:检查实验条件,确保实验是适当的。
通过这些解决办法,可以确定原因并解决问题。
毛利小五郎的徒弟
更换载体类型或者检查你的碱基适配度
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