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无苯酚氯仿是一种常用于病毒核酸提取的溶剂,通常在配制病毒核酸提取液时会使用。提取病毒核酸的具体配方如下:
配制10mM缓冲液:将40.8mg抗坏血酸和4.4mg抗坏血酸钠溶解在800μl水中,再加入200μl无苯酚氯仿,搅拌均匀即可。
配制病毒核酸提取液:将10mM缓冲液和淀粉(或其他淀粉类物质)按照一定的比例混合,具体配比可根据实验所需进行调整。淀粉可以促进病毒核酸的沉淀,从而方便核酸的回收。
在配制病毒核酸提取液时,应注意避免接触皮肤,并在通风良好的实验室内进行操作。
清清冷风
1. 取出洗涤液,按70%比例加入无水乙醇,如3mL加入7 mL无水乙醇,9mL加入21 mL无水乙醇,混匀。
2. 取1.5mL灭菌离心管1支,加入200 μL裂解液、20μL消化液D、4μL溶液A及100μL拭子涮洗液,充分温和振荡混匀,56℃水浴8 min。
3. 取出离心管,加入350μL无水乙醇,轻轻颠倒混匀6次。 将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,静置1min,12,000 rpm 离心1min,弃收集管内废液。
4. 将吸附柱放回收集管内,加500 μL洗涤液至吸附柱内,12,000 rpm 离心2min,弃收集管内废液。
5. 取出吸附柱,放入新的1.5 mL灭菌离心管内,加入50 μL洗脱液,12,000 rpm 离心1min,收集DNA溶液。提取得到的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。
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配制方法:在90mL无菌水中溶解10a电泳级SDS,加热至68助溶,加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至72,加水定容至11,分装备用。
毛利小五郎的徒弟
( 一 )
DNA提取的经典方法,即所谓的酚-氯仿提取法。因为使用两种不同的有机溶剂交替抽提更容易将蛋白除去,提取次序为酚、酚/氯仿(1:1)、氯仿,这种方法提取的DNA纯度高、片段大、效果好,缺点是较为繁琐。
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