双酶切插入目的基因的方向

dxy_tphcsz00

2022-11-26

是采用pET28a+质粒，HindIII是173，NdeI是238。上游引物酶切位点是NdeI 下游引物酶切位点是 HindIII，经过PCR扩增以后，发现目的基因片段连到质粒上必须是反的才可以，正向连不上去。可是我查阅的文章目的基因反着插到质粒去。

别人的文章，不单单是这一篇，好多目的基因片段的方向和质粒的方向相反的

2 个回答

周周zyl

2022-12-13

有帮助

双酶切插入目的基因的方向是反相的，多调整几次，应该就可以了，但顺序不能搞错。

土井挞克树

2022-11-27

有帮助

可以反向插，你记住插入的顺序，后续分析的时候做调整就行

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