真核质粒连接目的基因
idiotOC0P
双酶切真核质粒之后，做目的基因连接实验，可是连接之后做电泳检测发现只有目的基因条带没有连接后的质粒条带，这是为什么，做两次了都这样。
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3 个回答
balalaLy
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连接失败，确定你的目的基因片段两端有匹配的酶切序列？
idiotOC0P
设计引物是按照设定好的内切酶设计的，双酶切也是。
huarenqiang5
有帮助
主要考虑：1、是否位点没有切开
2、位点都切开了，有一段DNA太小，跑电泳跑出去了。
idiotOC0P
切是切开了，只是不知道双酶切是否切开（也做了两种酶单独的单酶切对照，都是跑得比质粒慢）双酶切下来的小片段只有20bp太小了
毛利小五郎的徒弟
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那说明没有连接成功，改变一下引物试一试
idiotOC0P
连接实验不是只用T4ligase吗，为啥改变引物
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