CRISPR/Cas9基因编辑后的PtargetF质粒消除不掉

在对大肠杆菌进行基因成功敲除后，在消除ptargetF质粒时发现消不掉，之前都是一次就消掉了，这次不知道为什么试了两次都没消掉，请问有遇到和我一样问题的吗？都是怎么解决的？什么原因造成的？谢谢。