3 个回答
汤姆卜丽波
参考一下这个文章https://wap.cnki.net/touch/web/Conference/Article/ZGXJ201711001258.html
bamboopiggy
环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类特殊的非编码RNA分子，与传统的线性RNA(linear RNA)不同，它是通过反向剪接形成的闭合RNA分子。circRNA不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴，通过外显子环化或内含子环化，将3'和5'末端连接起来形成完整的环形结构，避免被核酸外切酶降解，因而比线性RNA更稳定，更具有保守性。
现在对于circle RNA有各种各样的包装载体，腺病毒、慢病毒和AAV全套circRNA过表达和干扰载体的系统
你可以参考：http://www.wzbio.com.cn/special.php?cid=89
未来9
circrna表达载体是研究circrna功能机制必不可少的工具。
现有技术方案一的内容：以基因组dna为模板，以环状rna编码序列为中心，扩增其上下游很长(1000bp左右)的一段序列，然后插入到普通的表达载体上，从而实现过表达该环状rna的目的；现有技术方案一的缺点是：1)环状rna形成率无法保证，环状rna的形成率往往不到该序列线性rna的10％，对后继研究造成影响，2)pcr扩增片段长，难度大，周期长。
现有技术方案二的内容：目前大部分商业化的环状rna过表达载体，通过将某个环状rna上下游成环序列框架连接到一般的商业过表达载体上，中间添加一些克隆位点，达到方便快速表达不同环状rna的目的；现有技术方案二的缺点是环状rna基因片段两端必须加入酶切位点，才能保证环状rna基因能够连接到载体上，所加入的酶切位点序列会自动环化进环状rna中，所表达出来的环状rna会多出酶切位点的序列，可能会改变原环状rna的功能。因此这种方法不能准确地表达环状rna。
现有技术方案三的内容：根据环状rna的剪接原则，在某个环状rna上下游成环序列之间添加econⅰ(酶切产物的粘性末端只有一个碱基)和pmlⅰ(酶切产物是平末端)的识别序列，用econⅰ和pmlⅰ双酶切环状rna表达载体，线型环状rna表达载体的两端正好是剪接位点，利用重组的方式将目标环状rna的编码序列连接到环状rna表达载体中，实现环状rna的无缝环化；现有技术方案三的缺点econⅰ和pmlⅰ不是常用的限制性内切酶，活性较低，价格较高。
