实验问答4,363,165 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问请问有IBS-SSS量表吗？

天一湖医者

医学量表、计算器 / 消化 / IBS病情严重程度调查表（IBS-SSS）

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问大肠菌群实验结晶紫培养是阳性，需要煌绿乳糖胆盐肉汤实验验证吗

Topmicro

需要，从结晶紫中性红胆盐琼脂平板上挑选可疑菌落分别接种到煌绿乳糖胆盐肉汤管内培养，观察产气情况进行验证。

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问求问，我做的ROC曲线联合指标的面积比不上单个指标的面积，啥情况呢？我做的对不对啊，求大佬帮帮我说两句原因，我是个小白

bamboopiggy

如果单纯看你的说法，就是你的联合治疗，不如单药治疗，你首先看你下，你两个单药治疗的ROC曲线下面积是不是都大于0.5，如果都大于0.5，那没有办法了，如果其中一个小于0.5，你可以把这个结果翻转一下，再联合分析。

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问20220412分光光度计培训提问

bamboopiggy

是的，是仪器自动把光程归一化为1cm了。光程归一化为1cm后，则吸光值A为1时，相当于dsDNA浓度约为50ng/μL、或ssDNA浓度约为33ng/μL、或RNA浓度约为40ng/μL。由此，可根据吸光度估算核酸的浓度，这种计算在许多仪器中可自动进行。

1 回答86 围观

问求助6.12.24孔板细胞铺板密度，有大佬能给4倍镜下的照片参考一下吗？

dxy_gwrp7ndq

一般最适浓度为5～10×105细胞/ml。如一般10cm皿的细胞约300-500万个，一些细胞个体小也能达到1000-2000万，可根据所需细胞数目取出部分作稀释或连续稀释后计数。

3 回答238 围观

问测定酵母中的海藻糖含量，菌体已经收好存于-80摄氏度，拿出来之后可以先解冻了在用细胞破碎以破碎细胞吗？

Topmicro

可以先解冻再破碎，酵母有细胞壁比较皮实，而且解冻之后破碎也更方便。

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问为什么药物对肿瘤细胞突然没效？

府宅

会不会与每个孔中细胞的数目有关系？如果你每个孔中细胞数目与文献采用的细胞数不一样，也会导致抑制率不同。还有细胞还受培养环境的影响，温度溶剂都与文献报道的一致吗？并且实验的干扰因素也很多，建议每一批次做三次重复实验。多设置几个药物梯度（一般都是做九个梯度）；24h和48h接种不同的细胞密度。

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问大概多久测一次过氧化氢酶活性

未来9

测定方法中说是一分钟测一次,共测4次

4 回答135 围观

问样品中有无机杂质影响蛋白含量测定，有什么办法能降低干扰？

bamboopiggy

蛋白质的测定方法有好多，如：凯氏定氮法，双缩脲法，folin-酚法，考马斯亮蓝法，等等，你可以找一种与你的无机杂质不反应的方法来测。

4 回答111 围观

问生物成像中细胞成像的应用

vae1476

可以通过心肌细胞激光共聚焦扫描显微图像进行观察

2 回答120 围观

问利用Ni－NTA纯化蛋白的buffer，里面的咪唑成分大概能保存多久？

天一湖医者

2-8度避光一般可以保存2年。

3 回答122 围观

问重组人rac1蛋白检测生物活性方法

丁香粉猪猪

仅供参考可以看看这个，学习一下

1 回答85 围观

问用新的镍珠纯化蛋白，目的蛋白为什么挂不上珠？

天一湖医者

1. 因为 His标签被包到了蛋白三维结构里面。镍介质无法接触His 标签；2. 纯化工艺不利于结合作用发挥，例如咪唑；3. 蛋白不稳定，标签掉落

2 回答827 围观

问WB时怎么选择合适的内参蛋白呀

迟C迟

（1）根据样本的种属来源选择，如哺乳动物或者植物等（2）考虑目的蛋白的分子量大小，一般需要与目的蛋白的分子量相差5kd以上（3）根据蛋白表达位置选择不同的内参，不同的细胞器中选择的内参也不同

3 回答81 围观

问WB结果中，目的条带后面为什么有细细的条带？

未来9

可能是样品溶解不好，或存在一定程度的蛋白降解

4 回答90 围观

问请问在做bifc时，如何确定荧光发出的原因，是因为两个蛋白间相互作用，而不是因为两个蛋白浓度过高物理靠近发出的，如何界定这个浓度

天一湖医者

本实验需要设置阴性对照。即用pIB-YN155和pIB-nVC156 (VC156的N端带有atg，可以单独表VC156蛋白)。利用荧光显微镜观察时，需要调节荧光强度，在阴性对照组无荧光信号的情况下，观察实验组的荧光信号。

1 回答175 围观

问蛋白质和脂质互作都有什么实验可以验证？

dxywode

如果你搜“PIP Strips”，就会发现，它是脂质与蛋白质相互作用的研究神器。Echelon专攻各种抗体、分析检测试剂盒、抑制剂等科研领域，尤其擅长以细胞信号、脂类代谢和标记物研究为主。为研究治疗诸如癌症、糖尿病、炎症、感染和心脑血管疾病专家提供了有效的科研工具。PIP条带是2 x 6 cm的疏水膜，其上有100 pmol的八种磷脂酰肌醇和七种其他重要的生物脂质。它们用于在简单的蛋白质-脂质叠加

2 回答224 围观

问线虫寿命曲线应该如何制作

dxy_gwrp7ndq

线虫的生命曲线，横坐标是线虫的生长的日期，即天数，纵坐标是指在一个培养皿里，大概有百分之多少的虫子还是活着的。

3 回答548 围观

问本人纯化his标签蛋白，无论如何更换表达感受态和诱导条件，蛋白表达量都很低是什么原因？使用载体为32a，和28a都不理想

天一湖医者

a可能原因：超声功率不合适(太大，蛋白碳化，太小，蛋白没完全释放)解决方法：改变超声功率或者其它方法破碎细胞。b.样品或缓冲液不合适解决方法：确保缓冲液中螯合剂，还原剂，咪唑浓度不是很高。c.His标签暴露不完全解决方法：在缓冲液中加变性剂(4-8M尿素，4-6M盐酸胍)，然后用IMAC介质纯化。d.His标签丢失解决方法：必要时增加His的个数并确保正确表达，同时降低上样速度，确保足够的孵育时间

2 回答190 围观

问常用的蛋白纯化标签有什么特点？如何选择？

未来9

蛋白标签大体可分为三大类：遗传标签、in vivo标签和in vitro标签，最为常用的是遗传标签，即c-Myc、FLAG等。通过将目的基因克隆到含有标签的载体上，方便在下游通过抗体、荧光检测蛋白，或对蛋白进行纯化如何选择：1. 首先需要确定融合标签的目的，蛋白纯化首选His-Tag，Western blot首选Flag-Tag，免疫共沉淀可选择Flag-Tag或其他常用标签如HA、cMyc，活细

3 回答150 围观

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