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科研学霸天团,48小时有问必答
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吲哚美辛腹腔注射试剂怎么制备
dxywode
本试验处方中以二甲基甲酰胺和注射用水作为混合溶媒,提高吲哚美辛的溶解度,乙醇胺调节PH值,进一步增大吲哚美辛溶解度,乳酸调节pH值减少刺激性。吲哚美辛易溶于二甲基甲酰胺,但当加入等体积注射用水后吲哚美辛易析出。此外pH值的变化也能影响吲哚美辛的溶解。因此本处方中的影响因素主要有吲哚美辛的投药量,二甲基甲酰胺用量,乙醇胺用量及pH值的大小,根据主要影响因素设计如下的三个处方,通过观察是否有药物析出以
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问
感染细胞不同时间点收样,怎么确定什么时候收样?
dxywode
转染的质粒和promoter不同,细胞表达的时间也不尽相同。 一般在24-48小时之间。你第一次做的话,就勤快点常观察。
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问
求教!小鼠丘脑定向注射给药如何不容易反流?
天一湖医者
小鼠丘脑定向注射给药具体方法及步骤,希望可以帮到你。
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问
请问形成包涵体的融合蛋白,能使用包涵体裂解液之后,用Glutathione Sepharose 4B亲和层析吗?
天一湖医者
使用包涵体裂解液之后,最好选择Glutathione Sepharose这样载量更高,流速更快.
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问
请问大家常用于亚细胞定位做内质网标记都有哪些?
bamboopiggy
ER-Tracker™ Green (BODIPY® FL Glibenclamide),或者用ERp72 ,PDI 抗体都可以
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问
请问多高浓度的SDS,Triton100,NP40可以导致细胞核破裂?
bamboopiggy
不建议用sds,因为里离子型去垢剂,裂解强度比较大,一般建议用triton100 ,或np40。NP40 0.0.5% 作用5min,可以裂解掉细胞膜。
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问
放线菌中色素的分离大概需要多少色素提取物
天一湖医者
色素0.15g溶于50ml水中就可以。
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问
干细胞在培养瓶里一般4小时左右可以贴璧,8小时完全铺展,做迁移测试时放多长时间合适呢?
天一湖医者
一般认为24h为细胞的一个周期,在选取合适的时间点(6,12,24h)检测划痕宽度时,最好不要超过细胞一个周期的时间;③ 如果要单纯考虑细胞迁移,可以先用丝裂霉素(1μg/ml)处理1h,抑制细胞的分裂。
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问
干细胞CFU计数问题
bamboopiggy
造血干细胞的集落形成检测:1)将所需要的MethoCult®培养基在2-8℃过夜或室温融化。(2)用16 号钝针头的注射器将培养基分装于流式管中(3.3ml/管)(3)准备三个35 mm的培养皿,制备双份培养系统。具体方法如下:把两个35mm的带盖培养皿和一个盛有水的35mm无盖培养皿一起放置到100 mm的培养皿中。(4)准备CD34 细胞,细胞计数仪计数后用0.3mlIMDM 2%FBS稀释细
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问
细胞摄取实验是不是只有在做载抗癌药物时才需要做的呢?若所做的不针对癌细胞,是否可以不做细胞摄取实验呢?
bamboopiggy
这个取决于你要说明什么问题吧?如果你要说明你细胞基因的改变,会影响某种物质的摄取,你当然要做摄取实验啊。
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问
siRNA导入细胞有哪些方法,哪种最好?
bamboopiggy
1取决于你的实验目的,细胞还是动物2.要看你要导入的是什么细胞?贴壁细胞一般,用化学转染,悬浮细胞用电转的多。生殖细胞用显微注射,动物可以用载体导入。
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问
同种组织的两种细胞直接共培养
bamboopiggy
贴壁细胞一般用DMEM高糖,悬浮细胞一般用1640,两种细胞直接共培养的培养基可用DMEM高糖,因为DMEM高糖的营养成分比1640多。培养两种细胞的比例需要你做预实验确定,一般从1:1开始,当然 你可以评估一下它们在组织中的分布比例。
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问
想用荧光显微镜观察病毒感染细胞后的形态,是用普通光学显微镜还是需要荧光显微镜
bamboopiggy
这个要看你的病毒带不带荧光,,如果带荧光,可以用荧光显微镜,顺便还可以看一下转染效率
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问
病毒以MOI为1接种细胞,是不是需要提前测TCID50后再计算病毒接种体积
bamboopiggy
MOI是multiplicity of infection的缩写,中文译为感染复数,一般认为MOI是一个比值,没有单位,其隐含的意思是 pfu number/cell,即病毒颗粒数/细胞数。如果你的pfu/ml值为undefined109(9次方),那么1毫升病毒液中有10的9次方 个病毒颗粒。如果你知道病毒滴度(pfu/ml)的值,那就简单些啦(因为病毒滴度(pfu/ml)的值得出是比较麻烦的),MOI=(p
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问
培养贴壁细胞,例如小肠上皮细胞用胰蛋白酶消化的时间,如何判断?
bamboopiggy
加入胰酶后,润湿一下细胞,然后吸出胰酶,不用吸的太干净。然后镜下观察,细胞变圆了,就可以终止胰酶消化了,容易消化的细胞大概30s-1min,不容易消化的,可以放37度数分钟,主要镜下观察形态改变
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问
培养的原代卵巢颗粒细胞支原体污染如何判断?
bamboopiggy
400X看不到支原体的,检测支原体最简单的方法就是取培养液,直接进行pcr检测。
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问
如何制作简易的小鼠代谢笼
天一湖医者
这个比较详细,参考一下http://www.xjishu.com/zhuanli/01/201821722968.html
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问
请问如何确定药物作用于细胞的靶蛋白是什么?脂溶性很差的药物能通过细胞膜吗?
天一湖医者
.高通量筛选的方法 用微量滴定之类的方法,看分子能否与已知的蛋白质结合。一般只做计算机算出来的特定蛋白质
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问
植物外泌体或者细胞外囊泡如何提取蛋白质
未来9
提取外泌体及外泌体蛋白的常见方法如下:
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问
各位大神救命!帮我看看这是什么污染?应该如何防治?
bamboopiggy
感觉你还是重新提吧,这个是细胞间常见的真菌污染,感觉很难清除掉。再提的时候,注意无菌操作
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