关于Ig 结构与功能的研究，是近40 年来免疫学中的一大突破。在此之前，由于存 在于正常血清中的抗体有异质性，故对其结构的研究十分困难。自发现多发性骨髓瘤病人血清中含有均一的Ig （单克隆Ig） 以及应用酶或还原剂消化和解离Ig 技术，已得出Ig 一般结构的结论。五大类Ig 中，以IgG 的结构和功能研究得最清楚，Ig 的基本结构和功能都是以IgG 为代表说明的。Ig 分子巨大，含有1000 个以上的氨基酸残基。各类Ig 具有一定的结构 和特点。1963 年Porter 对IgG ...
在自身免疫性疾病中，人体组织细胞细胞核的核膜、核内的染色质、非组蛋白，以及核糖核酸（RNA）和相关的蛋白质等都可成为自身免疫反应攻击的靶子，产生抗核抗体（ANA）。其中有不少抗体因对疾病的诊断有高度的特异性，已成为诊断某一类疾病的血清标志性抗体，如抗双链DNA抗体、抗Sm抗体之于SLE，抗SSB抗体之于SS，抗Jo-1抗体之于多发性肌炎/皮肌炎等等。 间接免疫荧光法是检测自身抗体的标准技术。其特点是特异性强，通过荧光显微 ...
Pre-S1抗原是乙型肝炎病毒外膜蛋白的组成成分，它存在于完整的病毒颗粒(Dane)及管状颗粒的表面,具有很强的亲水性和免疫原性,其21-47肽段是HBV与肝细胞的结合位点，在HBV附着和侵入肝细胞机制中起重要作用。 Pre-S1抗原是反映HBV的感染与复制状况的一个良好指标 Pre-S1抗原主要存在于血清中HBV表面，提示机体内含有HBV就有Pre-S1抗原。Pre-S1抗原只存在于具有传染性的完整的乙肝病毒颗粒上，与 ...
化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay,CLIA）,是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。 1 化学发光免疫分析原理 化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利 ...
间接ELISA1．溶液准备： 包被液：50mM Na2CO3 （ pH9.6 ）, 20mMTris-HCl （ pH8.5 ） 或10mM PBS （ pH7.2 ）封闭液：一般封闭用BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶等洗涤液：0.02-0.05%Tween-20的0.1M磷酸盐缓冲液或者Tris盐缓冲液 （ pH7.4 ） 2．实验程序： 1 ） 将抗原按适当浓度溶解于包被液中。 2 ） 在对应的孔中加入100μl抗原，室温孵育2h或4℃过夜。 3 ） 倒空液体并拍干残留液体，用300μl洗涤液清洗两次。 4 ） 每个孔中加300μl封闭液， ...
中国医学科学院 中国协和医科大学 医学生物学研究所 胡方 董少忠 综述 李琦涵 审校 摘要 抗原由抗原呈递细胞（APC）摄取并加工成肽分子，以MHC-肽分子复合体的形式表达于细胞表面，由T细胞上TCR识别，激活特异的CTL。病毒基因可编码某些蛋白作用于该过程，进而逃免疫系统的识别和清除。本文综述了这一过程中抗原呈递、逃避方面的一些新进展。 免疫是生物体识别和清除抗原性异物的一种生理性反应。免疫系统分为天然免疫和获得性免疫两部分，两者相辅相成，通过一系 ...
M蛋白是浆细胞或B淋巴细胞单克隆大量增殖时所产生的一种异常免疫球蛋白，由于它产生于单一克隆，又常出现于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤病人的血或尿中，故称M蛋白。这些M蛋白大多无抗体活性，所以又称为副蛋白。 M蛋白血症可分为恶性与意义不明的两大类。恶性M蛋白血症多见于多发性骨髓瘤（包括轻链病）、巨球蛋白血症、重链病、7SIgM病（Solomen－Konkel病）、半分子病及不完全骨髓瘤蛋白病（C端基因缺陷）等。意义 ...
一、胶体金的制备根据不同的制备方法，可以制备出直径1－500nm的胶体金粒子，但做为免疫标记探针，其直径应在3-30nm范围内。在氯化金（HAuCl4）水溶液中加入还原剂使之还原并聚积形成胶体金粒子。使用不同种类、不同剂量的还原剂，可以控制所产生的粒子大小。即粒子大小取决于反应溶液中最初还原试剂和还原核的数量。还原剂浓度越高，核浓度也越高，氯化金的还原也就从更多的还原中心开始，因此产生的胶体金粒子数量越多，但体积也 ...
钩状效应是指免疫检测中由于抗原、抗体浓度比例不合适而致检测结果呈假阴性的现象。1929年Heidelberger利用等量抗体检测浓度递增抗原，当抗原浓度较低，抗体浓度相对较高时，沉淀反应不明显；当抗原浓度增加到与抗体浓度比例合适时，沉淀反应明显；继续增加抗原浓度时，沉淀反应反而减弱。据此绘出双相应答曲线，曲线高峰区域，抗体、抗原浓度呈最适比，沉淀反应明显，称等价带。高峰区域左侧，由于抗体浓度过高，沉淀反应不明显，称 ...
引起酶免反应显色淡、灵敏度偏低有很多因素，下面只介绍几种可能的较常见的原因：1. 试剂盒在运输途中时间太长，温度太高；要求运输时置于保温箱内运输，并放足够数量的冰块，尽量缩短运输时间。2. 试剂盒超过有效期；建议不要使用超过效期的试剂盒。3. 试剂、样品使用前未能平衡；建议使用前于室温平衡30分钟左右。4. 试剂开启时间过长，长菌；建议试剂开启后应该于半个月内用完。5. 移液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸头内壁挂液太多或内壁不清洁。建议使 ...
免疫分析中，非特异的蛋白吸附常常是阻碍高灵敏度的一个重要的因素。来自中科院等单位的研究小组开发了一种新的固相载体，有望达到"0"非特异吸附。以下是他们在 Analytical Chemistry 的文章摘要。Integrated Poly(dimethysiloxane) with an Intrinsic Nonfouling Property Approaching “Absolute” Zero Background in ImmunoassaysHongwei ...
肿瘤标志物检测的影响因素 1.肿瘤标志物具有特异性和非特异性的双重特点。 2.各种肿瘤特性的不同，如肿瘤的分期、大小、定位、组织来源及转移趋向等的不同。 3.各种抗体的不同，如多克隆抗体、单克隆抗体、抗体决定簇和抗体亲和性等的不同。 4.各种检测系统的不同，如检测原理、标记物、实验条件、检测技术、检测仪器和检测敏感度等的不同。 5.检验人员的专业水平和技术经验、以及实验室条件和实验的可靠性等的差异。 （1）甲胎蛋白（AFP） 分子量约为7万的糖蛋白， ...
免疫印迹法（western blot） 原理： 通过电泳区分不同的组分，并转移至固相支持物，通过特异性试剂（抗体）作为探针，对靶物质进行检测，蛋白质的Western印迹技术结合了凝胶电泳的高分辨率和固相免疫测定的特异敏感等多种特点，可检测到低至1～5ng（最低可到10－100pg）中等大小的靶蛋白。 一、抗原的选择和制备 A：样品的制备 1 组织： 组织的处理方法：组织洗涤后加入3倍体积预冷的PBS，0℃研磨，加入5×STOP buffer，180W，6m ...
基本原理 1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留 ...
ELISA法具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点，并具有操作简便、无放射性危害的优点，因而多年来广泛应用于血站和医院的实验室中，但在测定中常会出现一些误差和问题。我们通过几年的实验观察，认为影响结果的因素有如下方面。 1 试剂盒 （1）抗原、抗体活性对效价的影响：主要是试剂中抗体（或抗原）的效价降低或失活，结果不易判断。再有ELISA法灵敏度高，对杂质的反应灵敏度也高，实验中空白对照OD值偏高或假阳性。（2）酶结合物浓度过高，也 ...
ANCA（Antineurotrophil cytoplasmic autoantibody）即抗中性粒细胞胞浆抗体，是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为靶抗原的自身抗体，是一种在多数原发性小血管炎疾病血清中检测到的特异抗体。 ANCA一般应用间接免疫荧光法（IIF）来检验，并根据其产生的三荧光形态将ANCA分为三种，一种在胞浆中呈粗大颗粒状、不均匀分布者称胞浆型ANCA即cANCA；一种荧光沿细胞核周围分布呈线条状 ...
造成放射免疫分析中误差的可能来源有以下几方面： 1．各种仪器：设备的准确性、稳定性、效率以及被污染等情况带来的误差。如：①由于放射性测量仪器的稳定性、效率、样品试管的材料和均匀性及被测物的放射性强度等原因。②由于样品的自吸收，本底校正，测定时间，可能的污染等原因。③在试验室中所有的移液管、微量取样器以及天平的刻度、校准和使用方法等原因。④由于反应试管、移液管以及测定用试管等表面清洁度和检验地 带网所引起的不同吸附等原因都可以对 ...
目前，抗双链DNA抗体的检测方法无非包括下列几种，IFA、ELISA、LIA和RIA。IFA=间接免疫荧光法，该方法检测抗双链DNA抗体的特异性比较高，但敏感度差。当然试剂成本相对比较便宜。但用来检测抗体滴度从而监测病情恐怕不是很合适，原因是该方法在结果判读方面主观性太强，没有标准可以参考。LIA=条带酶免法（或叫条带印迹法，也有叫线性印迹法的），该方法由于dsDNA抗原包被不稳定，因此检测dsDNA抗体的结果并不 ...
流式细胞分析（Flow cytometry，FCM）是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞（或微粒）的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术，它具有如下几个特点： ①标本只要是单细胞即可用于分析，如血液、骨髓、体液中的细胞、培养细胞等，实体组织只要经处理后制成单细胞悬液也能分析，因此，实际上所有组织 ...
《临床实验室》：仲教授, 您好！2009年6月期临床实验室杂志的主题为自身免疫疾病，您是免疫学会临床免疫分会的主任委员，又是自身免疫疾病诊断的权威专家，我们知道现在有很多三甲和二甲医院都开展了自身免疫疾病的诊断，但是很多检验工作者对自身免疫疾病及其诊断不是非常清楚，现请您首先给我们解释一下自身免疫疾病的定义？ 仲教授：自身免疫疾病（autoimmune disease，AID）是指由于某些原因（感染、遗传、内分泌等，原因较复杂 ...
