FuGENE HD 转染试剂：覆盖更宽广的领域 Roche的FuGENE 6 转染试剂低毒高效、使用方便，应用细胞株已达500多种，可谓有口皆碑――即使近10年来Roche在试剂领域甚为低调甚少宣传，一支独秀的FuGENE 6 依然让Roche保持在转染领域数一数二的地位。经过10年的沉积，如今Roche新推出FuGENE HD转染试剂，再度将转染推向一个更高的层次―― 正在预备实验的你，对转染的最高期望是什么呢？ ―― 高效转染 ？毫无疑问！不单转染效率要高，适用细胞范围更要广：FuGENE HD 完全满足你的期望――即使RAW 264.7, MCF-7, PC-3, MA-10, HepG2, SH-SY5Y, A7r5, STO, SCC-61, SQ20B, T98G等等其他转染试剂难转染的哺乳动物细胞株，FuGENE HD 一样能给你满意的结果！ RealTime ready 智力大冲浪！答对5题，即获赠美国傲仕优质保温杯！ 独特的多用途转染试剂――无论是哺乳动物细胞转染，或者是昆虫细胞转染，

关键字： Streptozocin 链脲佐菌素 stz Streptozotocin 链脲霉素 糖尿病动物模型 STZ 诱发糖尿病动物模型的原理 STZ 对一定种属动物的胰岛β 细胞有选择性破坏作用，能诱发许多动物产生糖尿病，一般采用大鼠和小鼠制造动物模型。国外有学者报道选用雄性大鼠制造模型的成模率明显高于雌性大鼠。1 型糖尿病与2 型糖尿病动物模型的制备与STZ 注射的剂量有关系：大剂量注射时，由于直接引起胰岛β 细胞的广泛破坏，可造成1 型糖尿病模型；而注射较少量STZ 时，由于只是破坏一部分胰岛β 细胞的功能，造成外周组织对胰岛素不敏感，同时给予高热量饲料喂养，两者结合便诱导出病理、生理改变都接近于人类2 型糖尿病的动物模型。 造模前的喂养 Ⅰ型糖尿病模型成模比较快，通常大鼠在普通饲料适应性喂养2 周后即可开始造模 Ⅱ型糖尿病模型：高脂饮食诱导加小剂量STZ 。造模前喂以高脂( 高糖) 饲料，诱发出胰岛素抵抗。 高脂( 高糖) 饲料

Luciferase 报告基因技术 自然界中广泛分布着生物发光有机体，其中包括细菌、真菌、鱼、昆虫等。 在这些生物发光有机体中催化生物发光反应的各种酶都称之为荧光素酶 （Luciferases），底物则命名为荧光素（Luciferin）。自1986― 1987 年首次被当作 报告基因使用以来，荧光素酶基因已成为目前运用最广泛的报告基因之一。尽管 来自不同物种的荧光素酶及底物存在有很大的差异，但有一个共同点，即在生物 发光反应体系中均需发生氧化反应。它通过两个步骤使底物荧光素发生氧化作 用，而产生发光反应，此反应是ATP 依赖性的。杂环荧光素首先腺苷化，然后 通过氧化脱羧作用，产生AMP、CO2，并通过激活的荧光素中间产物发射光。 将反应所需的试剂与含有荧光素酶的细胞裂解液混合即会产生一种迅速衰 减（在一秒钟内）的黄绿色闪光（发射峰560 nm），这种光信号可用配备了便于 迅速混合反应物的自动注射装置的荧光检测仪（Luminometer）进行检测，也可 用标准的液闪仪对光信号进行记录。当底物过量时，发光量的总值与样品的荧光 酶活性成正比，因此，可对荧光素酶报

非损伤微测技术是一种实时、动态的活体测定技术。通过测定进出活体材料的离子和小分子的流速这一指标反映生命活动，是生理功能研究的最佳工具之一。非损伤微测技术与其他活体测定技术有所不同，不受被测材料的限制，无需标记，无需提取样品，就能够获得离子和小分子的空间运动大小和方向，具有广阔的应用前景。 非损伤微测技术自从1974年美国海洋生物学实验室（MBL，Marine Biological Laboratory，产生了54位诺贝尔奖获得者的实验室）的神经科学家Lionel F. Jaffe提出原初概念，到1990年成功应用于测定细胞的Ca 2+ 流速，已经解决了众多科学问题。今天，非损伤微测技术在生命科学、环境科学、材料科学等领域广泛应用，在国际顶尖期刊 N

大鼠 一氧化氮合成酶(T －NOS 、iNOS 、cNOS) 酶联免疫分析（ ELISA ） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中一氧化氮合成酶(T －NOS 、iNOS 、cNOS) 的 含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠一氧化氮合成酶 (T － NOS 、 iNOS 、 cNOS) 水平。用纯化的大鼠一氧化氮合成酶 (T － NOS 、 iNOS 、 cNOS) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮合成酶 (T － NOS 、 iNOS 、 cNOS) ，再与 HRP 标记的一氧化氮合成酶 (T － NOS 、 iNOS 、 cNOS) 抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的一氧化氮合成酶 (T － NOS 、 iNOS 、 cNOS) 呈正相关。用酶标仪

一、实验目的和内容 目的：学习检测水中大肠菌群的方法，了解大肠菌群数量与水质状况的关系。 内容：1．用滤膜法检测大肠菌群。 2．用多管发酵法检测大肠菌群。 二、实验材料和用具 复红亚硫酸钠培养基(远藤氏培养基)、乳糖蛋白胨半固体培养基、乳糖蛋白胨培养液、三倍浓乳糖蛋白胨培养液、伊红美蓝培养基(EMB 培养基)。 微孔滤膜(孔径0.45µm)、滤器(容量500mL)、抽气设备、镊子、发酵用试管、杜氏小管、培养皿、刻度吸管或移液管、接种环、酒精灯。 三、操作步骤 (一)水样的采集 1．自来水 将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再拧开水龙头流水5min， 以排除管道内积存的死水，随后用已灭菌的三角瓶接取水样，以供检测。 2．池水、河水或湖水 将无菌的带玻塞的小口瓶浸入距水面10～15cm深的水层中，瓶口朝上，除去瓶塞，待水流入瓶中装满后，盖好瓶塞，取出后立即进行检测，或临时存于冰箱，但不能超过24h。 (二)滤膜法检测大肠菌群 l．用无菌镊子将一无菌滤膜置于滤器的承受器当中，将过滤杯装于滤膜承受器上，旋紧，使接口处能密封，将真空泵与滤器下部的抽气口连接(

讨　论 1.小鼠生殖细胞单细胞悬液制备的影响因素 　　良好单细胞悬液的制备必须首先考虑所用小鼠的日龄。因为随动物日龄的增加，精原细胞开始分化形成各级生殖细胞，其绝对数目及所占生殖细胞的比例都逐渐下降，会给分离纯化增加困难。在成年小鼠的睾丸中，A型精原细胞只占所有精原细胞的1.25%，占未分化精原细胞的10.6%，仅占所有生殖细胞的0.03%［5］ 。因而用来分离精原细胞的动物的日龄应较小为好。一般小鼠选用生后8d的［2］ ，但也有人选用生后10d的；大鼠则选用生后9d的［6］ 。根据我们的前期工作并参考有关报道［2，3］ ，7～8d小鼠的生精上皮内基本只有A型精原细胞和支持细胞，其他各级生精细胞尚未发育形成，理论上可获得最大量的精原细胞。 　　其次，采用适当的程序及消化方法也是制备良好单细胞悬液的关键环节之一。从小鼠体内取出睾丸之后，我们先用尖镊仔细去除脂肪垫及睾丸白膜，将曲细精管在PBS中吹散，尽量将间质吹打成单细胞及组织碎片。通过静置或低速离心，将其去除，获得较为纯粹的曲细精管段。然后采用两次较短时间的胶原酶消化，将没有消散的睾丸间质消散并释放大部分管周肌样细胞，最大程度地

（一）实验原理 这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin―酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是：?在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。Folin―酚试剂中的磷钼酸盐―磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深兰色（钼兰和钨兰的混合物）。在一定的条件下，兰色深度与蛋白的量成正比。 Folin―酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这个测定法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，缺点是费时间较长，要精确控制操作时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子，同样容易干扰Lowry反应。而且对后者的影响还要大得多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。浓度较低的尿素（0.5%），硫酸纳（1%），硝酸纳（

酵母双杂交系统酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到，它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。大量的研究文献表明，酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作，也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的互作。因此，它在许多的研究领域中有着广泛的应用。 1、利用酵母双杂交发现新的蛋白质和蛋白质的新功能 酵母双杂交技术已经成为发现新基因的主要途径。当我们将已知基因作为诱饵，在选定的cDNA文库中筛选与诱饵蛋白相互作用的蛋白�由秆〉降难粜越湍妇�曛锌梢苑掷氲玫�D-LIBRARY载体，并从载体中进一步克隆得到随机插入的cDNA片段，并对该片段的编码序列在GENEBANK中进行比较，研究与已知基因在生物学功能上的联系。另外，也可作为研究已知基因的新功能或多个筛选到的已知基因之间功能相关的主要方法。例如：Engelender等人以神经末端蛋白alpha-synuclein 蛋白为诱饵蛋白，利用酵母双杂交CLONTECH MATCHMARKER SYS

1、 选取7~8周龄雌性小鼠，阴道口封闭，作为供体，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。 2、 47~48小时后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并与正常公鼠合笼；另取数只适龄母鼠（2月龄以上）作为受体，阴道口潮红，与结扎公鼠合笼。 3、第二天上午9:00前观察供体、受体，有精栓者拿出备用。受体笼拿出作好隔离措施。 4、10:30左右，断颈处死供体，手术取出整个输卵管，放入透明质酸酶~0.3mg/M2液中。显微镜下，用镊子撕开输卵管壶腹部，受精卵随同颗粒细胞即一同流出。 5、仔细观察放在透明质酸酶M2液中的受精卵，当受精卵周围的颗粒细胞脱离时，将受精卵吸出，放入M2液中洗涤，最后放在M16液中放入5% CO2，37C0培养箱培养。 6、在显微镜下观察，挑选细胞饱满，透明带清晰，雄原核清晰可见的受精卵待用。 7、安装持卵针和注射针，使其末端平行于载物台，在凹玻片的中央滴入一滴M2液，覆盖石蜡油，移入待注射的受精卵。DNA在注射针中的气泡应在先前全部弹走。 8、在高倍镜下，将注射针轻触持卵管，使DNA缓慢流

小鼠 酶联免疫 分析（ ELISA ） 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中 (Insulin) 含量。 实验原理 ： 本试剂盒应用 双抗体 夹心法测定 标本 中 小鼠胰岛素(Insulin) 水平。用纯化的 小鼠胰岛素(Insulin) 抗体 包被微孔板，制成固相 抗 体，往包被 单抗 的微孔中依次加入 胰岛素(Insulin) ，再与HRP 标记的 胰岛素(Insulin) 抗体 结合，形成抗体- 抗原 - 酶标抗体复合物 ，经过彻底洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 胰岛素(Insulin) 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中 小鼠胰岛素(Insulin) 含量 。 试剂盒组成 ： 试剂盒组成 48孔配置

　重度联合免疫缺陷(SCID) 小鼠是美国Bosma 证实的属CB - 17 近交系小鼠第16 号常染色体发 生隐性突变基因(SCID) 的突变型小鼠1 。纯合的 SCID 鼠基因导致小鼠几乎完全丧失T 和B 淋巴 细胞的功能, 人们便将这类小鼠广泛用于免疫 学、肿瘤学的研究。急性早幼粒细胞白血病 (APL) 在诱导分化剂全反式维甲酸作用下可向正 常粒系分化,临床上用全反式维甲酸(ATRA) 治疗 APL 虽能引起完全缓解,但APL 的发病机制仍不 太清楚,因此,建立一个稳定的动物模型用来研究 APL 诱导分化的机制有重要的意义。 1 　材料与方法 1. 1 　材料 1. 1. 1 　人白血病细胞系　人急性早幼粒白血病 HL - 60 细胞株从中南大学肿瘤研究所引进,用含 10 %小牛血清(杭州四季青) 的RPMI - 1640 培养 基(Gibco 公司产品) ,5 %CO2 ,37 ℃培养。 1. 1. 2 　SCID 小鼠　16 只,雄性,3～4 周龄(购于 上海中国科学院实验动物中心) ,小鼠在层流架内 带盖鼠盒中饲养(符合SP

蚊子是许多哺乳动物病原的宿主，包括寄生虫、细菌、病毒和真菌。疟疾主要是通过按蚊传播的疾病。为了控制疾病，了解传播的过程非常重要，因此需要研究蚊子幼虫的环境适应性。蚊子幼虫能够适应多变环境是因为蚊子的直肠有一个高度发育的离子调控系统。直肠负责吸收离子和营养，排出过量的盐和废弃物。但是这种调节的过程一直不清楚。 2010年，美国佛罗里达大学和MBL的科学家Smith等人使用非损伤微测技术 等方法研究了按蚊的离子调控机制，发现直肠中的两类细胞对离子转运和蛋白表达有显著的差异。 离子调控是蚊子幼虫生存的重要生物学过程，由直肠负责调控。这篇文章研究了按蚊直肠的两类细胞DAR（背部前突直肠）和Non-DAR（非背部前突直肠）细胞。在2%和50%的人工海水中用非损伤微测技术测定了质子流速，发现两种类型的细胞基础质子流速不同，且药物抑制剂处理后质子流速也不同，说明蛋白功能在两种环境中有差异。组织学分析表明Non-DAR细胞的结构适合调节离子转运。根据这个研究结果建立了直肠离子调控的模型，即N

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相关专题 一、实验目的 1.掌握酵母细胞的培养 方法 2.学会使用相差和微分干涉显微镜 二、异源互补技术概述 酿酒(芽殖)酵母的培养在许多方面可以与大肠杆菌相比较。这种酵母可以用标准的微生物学技术在液体和固体培养基中进行培养。大多数酵母菌 株在复合液体培养基中的倍增时间为90～120min，到静止期时细胞滴度为3×108到5×108细胞/mL。单个细胞在复合固体培养基上经过36 hr可长成1～2mm的单菌落，在合成的有限培养基中生长较慢，倍增时间至少增加为原来的两倍，且细胞的最终滴度仅达到2×107到3×107细胞/mL。在有限培养基平板上菌落需大约60 hr才能长成容易计数的大小。在复合或有限培养基上生长的菌落能影印培养或转移到膜上，进行分子水平的分析。 非洲粟酒裂殖酵母和其近亲酿酒酵母一样，是一种子囊真菌，但它与发芽酵母的关系并不密切，两种酵母的蛋白质序列和基因同源性在60﹪到90﹪。与酿酒酵母相比，非洲粟酒裂殖酵母通常是单倍体细胞，可分为两种交配型，在饥饿情况下不同的交配型单倍体进行交配，

相关专题第一部分一、 基本步骤：1、目的基因(DNA 和mRNA)的查找和比对;2、引物 、探针的设计;3、引物探针 的合成;4、反应体系的配制;5、反应条件的设定;6、反应体系和条件的优化;7、荧光曲线和数据分析;8、标准品的制备;二、技术关键：1、 目的基因(DNA和mRNA)的查找和比对;从http://www.ncbi.nlm.nih.gov/网点的genbank中下载所需要的序列。下载的方式有两种：一为打开某个序列后，直接点击“save”，保存格式为“.txt”文件。保存的名称中要包括序列的物种、序列的亚型、序列的注册号。然后，再打开DNAstar软件中的Editseq软件，点击“file”菜单中的“import”，打开后点击“save”，保存为“.seq”文件。另一种直接用DNAstar软件中的Editseq软件，点击“file”菜单中的“open entrez sequence”，导入后保存为“.seq”文件，保存的名称中要包括序列的物种、序列的亚型、序列的注册号。然后要对所有的序列进行排序。用DNAstar软件中的Seqman软件，点击“sequence”菜单中的“ad

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