免疫比浊法发展历程

早期免疫分析通过观察沉淀物形成，凝集及溶血现象发生来分析，如免疫扩散、免疫电泳、血凝试验、补体结合等。

 

上世纪50年代末60年代初，利用AG-AB复合物形成使浊度改变，再用比浊计来比浊，但因其敏感性差未被接受。

70年代初，开始有自动检测系统，但因其用的是激光为光源，固定波长，灵敏度较低，而且时间一般要2—3小时，很难满足临床需要。

 

70年代未，速率比浊计的出现，使抗原抗体结合的反应在几十秒内出结果，可以说是免疫化学测定的革命性的发展。

 

 

随着标记技术的发展，免疫化学纳入临床化学检验范畴。

免疫浊度测定的基本原理是：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过量时，形成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出受检物的含量。

 

 

免疫浊度测定法按照仪器设计的不同可以分为两种，即比浊仪测定（turbidimetermeasure）和散射比浊仪测定（nephelomitermeasure）。比浊仪测定是测量由于反射、吸收或散射引起的入射光衰减，其读数以吸光度A表示。A反映了入射光与透射光的比率。散射比浊仪测定是测量入射光遇到质点（复合物）后呈一定角度散射的光量，该散射光经放大后以散射值表示。两者的比较见图一：

经典的比浊试验有4个缺点无法克服，即操作繁琐、敏感度低（10～100μg/ml）、时间长和难以自动化。根据抗原与抗体能在液体内快速结合的原理，70年代出现了微量免疫沉淀测定法，即胶乳增强免疫透射比浊法（PETIA）和免疫散射浊度测定法。这2种技术皆已常规用于临床体液蛋白的检测，并已创造出了多种自动化仪器。免疫散射浊度法本刊曾在去年特种蛋白分析仪专刊详细介绍，本期不再赘叙，有兴趣的读者请见《临床实验室》2008年第二期。本期主要介绍透射比浊法。

 

单纯评价胶乳增强免疫透射比浊法（PETIA）和免疫散射浊度测定法的优劣，本刊觉得意义不是很大，只要能满足于临床、结果稳定、敏感度高、操作简便，单纯方法学的先进与否应该放在次要位置。

一、  传统免疫透射比浊法

当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。这一方法早于1959年Schultre和Schuick等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。其原理是，利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。

由于免疫复合物的形成有时限变化，当抗原抗体相遇后立即结合成小复合物（＜19S），几分钟到几小时才形成可见的复合物（＞19S）。作为快速比浊测定，这种速度太慢，加入聚合剂（或促聚剂）可加速大的免疫复合物形成。目前促聚剂多用聚乙二醇（MW6000～8000），浓度约为4％。

浊度测定亦有其弱点。其一是抗原或抗体量大大过剩时易出现可溶性复合物，造成测定误差，测定单克隆蛋白时这种更易出现；其二是应维持反应管中抗体蛋白量始终过剩，这个值要预先测定，使仪器的测定范围在低于生理范围到高于正常范围之间；其三是受血脂的影响，尤其是低稀释度时，脂蛋白的小颗粒可形成浊度，使测定值假性升高。