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如果您经常遇到对RNA样品的质量拿不准的情况,为什么不试试这个?

RNA样品的完整性在应用芯片技术(Microarray)和RT-PCR的基因表达分析实验过程中至关重要。传统的RNA样品QC只是界定RNA浓度,而对RNA 完整性没有针对性的测定标准。2100 Bioanalyzer为您提供了一整套快速简便的total RNA 及mRNA完整性测定平台。今天,RNA Integrated Number (RIN),已经成为了世界公认的最为权威可靠的RNA样品质量控制标准之一。“The Introduction ...

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【共享】远离EB,核酸染料的发展!

前一段时间实验室要革新核酸染色技术,于是查了一下这方面的东东,发现有好多产品面市了,现提供几个有用的资料,希望能对大家的健康有用!-------------------------------GoldView(GV)核酸染料 http://www.sbsbio.com我们实验室在用这个产品,尽管效果不如EB,但是无毒害的,所以还是要好些的,并且用看EB的紫外波长就可以了,所以成本要小,推荐使用GoldView(GV)是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核 ...

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【共享】RNA干扰:让致病基因沉默

Andrew Z. Fire 生于1959年,1983年于美国麻省理工学院获生物学博士学位,现任美国斯坦福大学医学院病理与遗传学教授。Craig C. Mello 生于1960年,1990年于美国哈佛大学获生物学博士学位,现任美国马萨诸塞大学医学院分子医学教授。2006年10月2日,瑞典卡罗琳斯卡研究院颁发了本年度诺贝尔生理学或医学奖,美国斯坦福大学医学院的Andrew Z. Fire和马萨诸塞大学医学院的Craig C. Mello因发现一种全新 ...

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【原创】miRNA Northern Blot实验技术应用

miRNA Northern Blot实验技术应用MicroRNA(miRNA)是真核生物中一类长度约为20-25nt(核苷酸)的非编码单链RNA分子,在生物进化过程中高度保守,约占整个基因组基因总数2%。大量研究表明,miRNA在多种生物过程中起关键作用,包括细胞的发育、分化、增殖和凋亡等;并且功能研究已证实多种miRNA分子与肿瘤发生、发展过程相关,miRNA具有类似于致癌基因或抑癌基因的作用。最早被发现的两个miR ...

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基因芯片

随着人类基因组(测序)计划(Human genome project)的逐步实施以及分子生物学相关学科的迅猛发展,越来越多的动植物、微生物基因组序列得以测定,基因序列数据正在以前所未有的速度迅速增长。然而,怎样去研究如此众多基因在生命过程中所担负的功能就成了全世界生命科学工作者共同的课题。为此,生物芯片,一项将计算机芯片制作技术与生命科学研究相结合的新兴技术应运而生了!  计算机芯片的工作本质上是对0与1这二个数字以各种方 ...

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【资源】microRNA靶标数据库和识别软件资源大全

以下是整理的microRNA靶标数据库和软件资源列表,希望对microRNA的研究者有所帮助。(1)miRbase:众所周知的microRNA基因注释数据库。目前miRBase只提供了microRNA的靶标的预测软件的链接(如:PicTar)。最新版本发布时间:2010年9月。网址:http://mirbase.org/index.shtml(2)starBase:一个高通量实验数据CLIP-Seq(或称为HITS-CL ...

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【交流】《Science》:发现人类RNA沉默机制

据《科学》杂志4月23日报道,MicroRNA在人体发育过程中起着意想不到的作用。法国科学家称核糖核酸沉默机制(RNA silencing)能够抵抗人体中的病毒,不可思议的是,小RNA (miRNA)竟然是组成这一机制的基础。“科学家一直认为miRNA与调节内源基因有关,而小分子干扰核糖核酸(iRNA)能够控制外源基因,尤其是病毒RNA基因,”该文的主要作者、来自法国斯特拉斯堡的植物分子生物学院的查利斯·亨利·莱西利亚在《科学 ...

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分子遗传学常用词汇(中、英文)

分子遗传学常用词汇(中文)腺嘌呤Adenine(A):一种碱基,和胸腺嘧啶T结合成碱基对。等位基因(Alleles):同一个基因座位上的多种表现形式。一般控制同一个性状,比如眼睛的颜色等。氨基酸(Amino Acid):共有20种氨基酸组成了生物体中所有的蛋白质。蛋白质的氨基酸序列和由遗传密码决定。扩增(Amplification):对某种特定DNA片段拷贝数目增加的方法,有体内扩增和体外扩增两种。(参见克隆和PCR技术)克 ...

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【共享】转贴:核酸分离纯化实验技术指南!

核酸分离纯化实验技术指南总RNA提取常见问题分析Q:RNA降解A:1. 新鲜细胞:如果试剂没有问题,且外源性污染也可以排除,那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如 果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞,一定要使裂解液能覆盖住细胞。2. 新鲜组织:某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏,胸腺等),即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是:在液氮条件下将组织研碎,并且匀浆时使用更多裂解液。3. 冷冻样品:样品取材后应立即置于 ...

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【原创】入门级T载体构建过程

在丁香园见过很多大佬分享载体构建经验,所以我这里写的T载体构建只能算是入门级,给新手提供一点思路,有什么不足之处还希望大家多多指正。我克隆的这个片段大小是1.8kb,用的是TaKaRa的LA-Taq酶做的PCR。反应体系:undefinedbuffer 5 ulMgCl2 5 uldNTPs 8 ulPrimer 1 1 ulPrimer 2 1 ulLA-Taq 0.5 ulcDNA 1 ul (1ug左右基因组DNA)ddH2O up to 50 ul按照TaKaRa的说明书,我用了Cool Start法, ...

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【分享】关于专基因话题的某生物工程公司药理学博士给我的回信(请勿删帖)

前不久在本论坛对转基因食品的一些探讨,中间发生了很多插曲,今天我收到了某生物工程的药理专业jinlzhao博士回信:全文如下:哈药:你好,最近太忙,无暇仔细阅读您的帖子,今日看毕,给出我的一点意见,你可以在合适的时候发出。首先声明,本人不熟悉转基因食品,但是本人有幸做过转基因动物实验。以我的经验以及我和国外几位转基因同行的交流,我发现,转基因动物实际上是不可控的,或者说是很难控制的。转基因动物的制作过程,在此我就不 ...

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【共享】改良热硼酸盐法提取RNA

(1)取3 g样品,加入10% 样品重的多聚聚乙烯吡咯烷酮(PVPP),用液氮研磨成细粉状,将细粉分为每份约3 g,并贮藏于-80℃下。(2)在5O ml falcon管中加入2O ml提取缓冲液。提取液的组成为0.2 mol/L 脱水四硼酸钠(sodium tetriborate decahydrate)、30 mmol/L 乙二胺四乙酸(EDTA)、1% (W/V)十二烷基硫酸钠(SDS)、1%脱氧胆酸钠盐。再加入0.0309 g二硫苏糖(DTT)、200 ul乙基苯基聚乙二醇(NP-40 ...

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全长cDNA文库的构建—SMART技术

真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程,因此mRNA的3'末端都带有一段Poly A,这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5'端的序列各不相同,如何获得全长的cDNA,如何扩增由微量的mRNA逆转录得到的cDNA文库、如何利用已知片断序列得到全长的cDNA(即RACE),曾经是一个令人困扰的问题。常见的做法是在合成cDNA的双链后在两端连上接头,利用已知的接头序列再进行扩增 ...

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我构建载体的思路,请各位老师指教!

以下是我构建载体的思路,但自己心里没底,不知是否可行,请各位老师指教!目 的:构建hPOT1正反义基因真核表达载体材料 DH5α大肠杆菌由学校细胞生物教研室提供;含全长hPOT1 cDNA的pLPCNMyc POT1质粒由美国Rockefeller大学的de Lange教授惠赠;pcDNA-3.1(-)真核表达载体购自美国Invitrogen公司;限制性内切酶BamHⅠ、Xho Ⅰ、Nhe I、T4DNA连接酶和牛小肠碱性磷酸酶(CIP)购自 ...

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【共享】操作RNA的注意事项整理

一、RNA抽提注意事项_尽可能无RNA酶的环境下操作,最好有专门场所_耗材的处理:电泳槽需0.5 M NaOH处理过夜后DEPC水清洗试管氯仿浸泡处理后DEPC水清洗枪头和eppendorf管DEPC水浸泡后灭菌处理_实验者本身防护:一次性手套,口罩等_启盖前震荡离心管有助于防止气溶胶形成_正确的操作方式二、RNA操作常见问题分析 问题     可能原因        解决方法产量太低    样本裂解或匀浆不充分   延长匀浆时间    RNA沉淀溶解不充分      65℃加热可促进溶解A260/A2 ...

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【原创】采用GenEscort™ 转染试剂实施RNA干扰(RNAi)实验进行肿瘤的基因治疗研究

以FAK为靶点的RNA干扰的黑色素瘤基因治疗RNA 干扰(RNA interference, RNAi)是由双链RNA 介导的序列特异性的转录后基因沉默现象。它通过识别与之序列相同的mRNA 来使特定基因在转录后水平被降解。RNAi 技术具有高的基因沉默效率和特异性, 为基因治疗等研究领域提供了一个新的研究手段。黏着斑激酶(FAK)是一种定位于黏着斑的非受体型酪氨酸激酶,参与调控细胞的运动和增殖等生命功能。FAK 在肿瘤的生成和恶化过程中 ...

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RNAi 和DNA芯片的结合

尽管研究基因组的技术已经相当先进,科学家们还在致力不断的创新和改造技术使之更为强大。现代分子生物学两个划时代的技术——DNA芯片和RNAi (RNA-mediated interference) ,正在掀开生物医药的新篇章。RNAi,通过双链RNA引发目标靶基因沉默的一项强大的新技术,专一性强,可大规模操作,重复性高,应用前景极为广阔。另一方面,DNA芯片技术可以提供特定条件下一个细胞中所有基因表达情况的全景图,同样具有无 ...

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【原创】DNA合成公司的尴尬和困惑

DNA合成公司的尴尬和困惑DNA合成的价格降到这个份上,恐怕每家合成公司都在暗自掂量:还值不值得在DNA合成上继续投资?眼看人家国外的DNA合成公司已经把毛细管电泳、质谱分析等先进手段用在了Oligo DNA的质量监控,而我们还停留在PAGE检测上,条件稍好一点的,也就是再做一下HPLC分析。赛百盛近期与美国一家顶尖的DNA合成公司合作,对国内的DNA合成质量进行了一番分析研究。说是合作,是人家客气,其实是向人家 ...

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【转贴】优化基因表达之:基因的重新设计和合成

http://www.ebiotrade.com/bbsf/xjszl/B20027816518.asp优化基因表达的关键因素之:基因的重新设计和合成密码子最佳化(codon optimization)遗传密码有64种,但是绝大多数生物倾向于利用这些密码子中的一部分。那些被最频繁利用的称为最佳密码子(optimal codons),那些不被经常利用的称为稀有或利用率低的密码子(rare or low-usage codons)。实际上用 ...

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分享:PCR 引物设计及软件使用技巧

PCR 引物设计及软件使用技巧张新宇,朱有康,高燕宁(中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所,北京100021)摘要:本文旨在介绍使用软件设计PCR 引物的技巧。在PCR 引物设计原则的基础上,详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法,并对其各自的优缺点进行了比较。一般性引物自动搜索可采用“Premier Primer 5”软件,而引物的评价分析则可采用“Oligo 6”软件。关键词:PCR;引物设计中图分类号:Q524 文献标识码: 文章编 ...

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