PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时 ...

下载：http://www.rayfile.com/zh-cn/files/eb54752e-9d60-11e0-a49d-0015c55db73d/或：miRNA实验指南(中文版).part1.rar下载：http://ishare.iask.sina.com.cn/f/16562038.html?from=likemiRNA实验指南(中文版).part2.rar下载：http://ishare.iask.sina.com.cn/f/165 ...

近年来，ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9等基因组编辑技术可谓是层出不穷，尤其是CRISPR/Cas9，一出现便在全球范围内掀起一股热潮。同时，各大公司也开发出一系列相应的产品，其中一种至关重要的就是基因敲除阳性克隆筛选的试剂。目前，市面上只有Genloci的CruiserTM、Transgenomic的SURVEYOR和NEB的T7EI这三种产品和测序这种方法，被用于基因敲除阳性克隆的筛选。然而，SUR ...

1、实验目的提取人体细胞的总RNA和mRNA。2、本实验所需试剂1）、CNE-2细胞及培养细胞的一系列条件，2）、PBS缓冲液， TRIZOL试剂，3）、DEPC处理过的水、大、中、小Tip及1.5 ml EP管,4）、新的氯仿、异丙醇和乙醇，5）、mRNA分离试剂盒：Oligotex mRNA Mini Kit,Cat.no.:70022, QIAGEN。6）、新配的电泳缓冲液，专跑RNA的琼脂糖（Agarose）。3、实验流程3.1 细胞总RNA的提取1）、6孔板 ...

PCR/RT-PCR疑难问题解答（一）［ 作者：佚名 转贴自：210.83.8.237 点击数：23 文章录入：kay76 ］一、问题：RT-PCR灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物。可能原因：1．RNA被降解建议解决方法：在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA使用良好的无污染技术分离RNA；在将组织从动物体取出后立刻处理在100％甲酰胺中储存RNA；如果使用胎盘RNase抑制剂，不要加热超过45℃或pH超过8.0，否 ...

1、植物总RNA的提取以白菜花药组织为试材, 利用改良Tris-硼酸法提取花药总RNA。提取花药RNA的产量高、质量好、纯度高, 适用于mRNA差异显示及基因表达的Northern印迹等的RNA提取。分别采取蕾期和盛花期的花蕾和花朵, 迅速将花药剥离, 分装称重后液氮中速冻, - 80℃保存。1　RNase的灭活　所有用于RNA提取的玻璃器皿均在180℃条件下烘2h以上, 塑料管和枪头用 0. 1%焦碳酸二乙酯(DEPC)溶液在 37℃条件下处理24h后高压灭菌。2　 ...

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象，它是指当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA(double stranded RNA，dsRNA)时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默的现象，这种现象发生在转录后水平，又称为转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing，PTGS)。外源dsRNA 进入细胞后产生的小分子干扰RNA（s ...

Mutation SurveyorMutation Surveyor 是美国Softgenetics公司和中国华生恒业科技有限公司联合开发的Mutation/SNP检测软件，用来实现高通量(high-throughput)，高灵敏度(sensitivity)和准确率(accuracy)的DNA突变/SNP检测，目前已被全世界数百家知名机构使用(国外著名专家对Mutation Surveyor的评价和意见)，在不到一年的时间内，分 ...

DNA 异常甲基化与肿瘤临床张吉才编译DNA甲基化是一种常见的人类DNA修饰,它是在DNA甲基转移酶（DNMT）催化下将甲基加到CG二核苷酸的C上形成的。因甲基化改变只影响DNA的结构，而不影响遗传编码，它被视为一种外遗传变化，而不是遗传变化。由于人基因组能通过脱氨作用将mC变为T，人基因组有较高清除CG二核苷酸的能力。但人基因组内仍有少量的区域富含CG二核苷酸，长度可达若干kb，这些区域称CPG岛。其它区域内的 ...

原文链接：http://genloci.biomart.cn/news/134612.htm●?我们有专业的团队以凌建群博士（基因重组操作系统IOS技术发明者，曾任美国斯坦福大学医学院资深研究员和实验室主任）为研发核心，来自美国斯坦福大学、丹麦哥本哈根大学、北京大学、浙江大学、南京大学、厦门大学，东南大学等国内外知名院校的优秀学子加盟。● 我们有成熟的技术平台、齐全的实验设备吉锐生物为您提供完整的基因敲除解决方 ...

目前很多学生物的朋友都感觉不好找工作，相对来说，生物学还不是热门。其中原因主要是因为当代生物科技成果大都没有产业化。生物类产品主要有试剂，试验仪器等，其客户主要为科研院所，少数厂家。真正与普通老百姓相关的产品几乎没有。那么生物科技如何实现产业化呢？生物农业，酶工程，生物制药等无疑是未来的发展方向，但目前却少有产业化。目前真正可以产业化的是直接与个人生老病死相关的基因检测，基因保健，基因治疗等产品。其中疾病易感基因 ...

刚刚看到的，内容不是太多。http://structure.biochem.queensu.ca/protocols/感觉有些东西还是不错的，摘录出来：Purification of 6xHis-Tagged ProteinsWhere (Sample) is noted, take an aliquot of the material and boil in SDS-PAGE sample buffer for running on a gel.1)Inoculate single colony of BL21(DE3) c ...

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1 溶解核酸酶P1（sigma)的冷冻干燥物与1.0ml30mM醋酸缓冲液（PH=5.3）？不知道此配法行不行？在sigma的说明书上没有具体说明！酶活性:1mg核酸酶P1在1小时，ph5.3 ,T=50 能够把2gRNA或0.2gDNA酶解为5-单核甘酸促进此酶的稳定性：在孵育时，可加zn和人血清白蛋白增加其稳定性！2牛小肠碱性磷酸酶试剂准备• 10mM Tris-HCl (pH 8.0)• CIAP stop buffer10mM Tris-HCl (pH 7.5)1mM ...

Electrophoresis其实并不简单我们要学的还很多Chemical Safety . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 334What Is the Safest Approach to Working withAcrylamide? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 334What Are the Symptoms of Acrylamide Poisoning? . . . . . . 335What Is the Medical Response to Accidental AcrylamideExposure? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 335How Can You Dispose of Excess, U

RNA Related Links MicroRNA LinksThe miRNA Registry at Rfam (Sanger, UK)http://www.sanger.ac.uk/Software/Rfam/mirna/index.shtmlMirScan Web Serverhttp://genes.mit.edu/mirscan/TargetScan Web Serverhttp://genes.mit.edu/targetscan/MirSeeker Web Serve ...

各种微生物转化方法汇总！将不断更新不同微生物的转化方法！目前有下列微生物的转化方法：大肠杆菌http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/28094_1.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/thread/2285320http://www.dxy.cn/bbs/thread/1829449双歧杆菌http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=2 ...

连接非常丰富，值得收藏：http://bioinformatics.vg/仅PCR就有很多内容：http://www.bioinformatics.vg/biolinks/bioinformatics/PCR%2520and%2520Primer%2520Design.shtml内容有：Sequence AnalysisManipulation, Search, Features, Retrieval, Alignment, Phylogeny ... ...

我要开始做RFLP，需要买NEB的3种限制性核酸内切酶：RsaⅠ，DdeⅠ，BstUⅠ，但在NEB的网站上查到的这3种酶的说明却看不懂，因为不知道要买多少，所以也不敢买，急死我了！！！现在以RsaⅠ的说明为例，希望高手能解决我的燃眉之急，多谢了！！！Rsa I#R0167S 1,000 units $50 (USA)#R0167L 5,000 units $200 (USA)NEBuffer 1 2 3 4% Activity 100 100 50 1005´ ... G T^A C ... 3´3´ ... C A^T G ... 5´Source: An E. c ...

DNA QUANTITATION--------------------------------------------------------------------------------AGAROSE-GEL METHOD WITH ETHIDIUM BROMIDE STAINING1) The DNA for assessment was removed from cold storage and heated at 37oC for 30 min (or 3 min at 60oC ). Flicking the bottom of tubes ensured that all the DNA has been suitably r ...