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【交流】蛋白质实验相关技术(很经典的阐述)

蛋白质提取与纯化技术选择材料及预处理  以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识,但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中,如盐析,有机溶剂提取,层析和结晶等;二是将混合物置于单一物相中,通过物理力场 ...

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ICAT 同位素代码标记技术相关资料贴

随着ICAT的技术日趋成熟,它作为一种较新的定量蛋白组学工具越来越吸引着大家的眼球,勿庸置疑它是定量蛋白质组学的方向之一。版面上之前也有过很多的相关讨论,可以说是非常不错,没有看过的朋友可以参考:1. 由biodna超版发起的ICAT精华贴:http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=408757&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=02. codegreen主任进一步的一些思考和见解: ...

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【进展|热点】解读2009诺贝尔生理/医学奖: 端粒酶(欢迎相关方向战友谈体会,有奖!)

2009年度诺贝尔生理学或医学奖在瑞典卡罗林斯卡医学院揭晓,三位美国科学家伊丽莎白·布兰克波恩(ElizabethH.Blackburn)、卡罗尔·格雷德(Carol W. Greider)以及杰克·绍斯塔克(JackW.Szostak)共同获得该奖项。他们发现了由染色体根冠制造的端粒酶(telomerase),这种染色体的自然脱落物将引发衰老和癌症。  伊丽莎白·布兰克波恩来自美国加利福尼亚旧金山大学,于1948年出生于澳大利亚。 ...

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【分享】Cell杂志评出的10篇文章!全部全彩pdf!

还是重磅出击!——Cell杂志评出的10篇文章!全部全彩pdf!《细胞》08年11月最受关注的十篇论文《细胞》创刊于1976年,现已成为世界自然科学研究领域最著名的期刊之一,并陆续发行了十几种姊妹刊,在各自专业领域里均占据着举足轻重的地位。《细胞》以发表具有重要意义的原创性科研报告为主,许多生命科学领域最重要的发现都发表在《细胞》上。11月《细胞》前十名下载论文为:1. An Oncogenomics-Based In Vivo RNAi Sc ...

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【专题讨论】新手做WB的几张片子,请各位高人指点。

我是一个门外汉,刚刚做WB。做出来后全是模糊的片子,还有就是只有黑点,没有条带。一直没找到原因。恳请各位高人教导。并且按照以下的方法做。我做的是SD大鼠骨骼肌组织的蛋白检测,取300mg肌肉,最终加2.4ML裂解液。10000转离心10分钟。定蛋白也是按一下方法。上样按每10微升80微克蛋白上的样。用的是大连竞迈公司的垂直电泳仪。装模是半干法,按没分钟1KD转的。一抗1:1000.二抗1:6000。。 我测的蛋白在95KD ...

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【资源】抗体制备技术

免疫检测法 抗体制备技术  抗体(antibody,Ab)是机体免疫系统受到抗原刺激后产生的特异性球蛋白,称免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。根据其重链稳定区的分子结构和抗原性的不同,可将为类Ig分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE等五大类。由遗传基因决定所产生的抗体,称天然抗体(natural antibody),由抗原激发免疫细胞产生的抗体,称免疫抗体(immune antibody)或称特异地性抗体。人工制 ...

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【原创】Western Blot实验步骤

一直感觉园子里针对Western Blot实验的帖子很多,最近浏览了一下蛋白实验的论坛,看到还是有很多同学遇到各种各样的问题,我就把我们实验室比较成熟的Western Blot实验步骤整理了一下,也挂出来供大家参考一下,希望对您的实验有帮助。实验步骤:1.分别配制 5%浓缩胶和12%分离胶 12%分离胶10mL 5%积层胶6mLH2O 3.3mL H2O 4.20mL30% Acrylamide 4mL 30% Acrylamide 1mLpH8.8 Tris HCl(1. ...

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【转载】凝胶层析+亲和层析+离子交换

凝胶层析凝胶层析又称为分子筛层析或凝胶过滤。具有分子筛作用的物质很多,如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。以葡聚糖凝胶应用最广,商品名是sephadex型号很多,从G10到G200,它的主要应用范围是:①分级分离各种抗原与抗体;②去掉复合物中的小分子物质。如除盐、荧光素和游离的放射性同位素以及水解的蛋白质碎片;③分析血清中的免疫复合物;④分子量的测定。(一)原理凝胶是一种多孔性的不带表面电荷的物质, ...

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【分享】一些专业书下载

1.Principles of Genetics ,Tamarin,7th_Edition.我从网上找来的,绝对可以下载,非常感谢上传者,也感谢首发者。下载时不可以用任何下载工具,不然下载不了的。http://rapidshare.com/files/5709290/Principles_of_Genetics__Tamarin__7th_Edition.pdf2.Working with Molecular Genetics(with soluti ...

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蛋白质功能预测

蛋白质功能预测一、根据序列预测功能的一般过程如果序列重叠群(contig)包含有蛋白质编码区,则接下来的分析任务是确定表达产物——蛋白质的功能。蛋白质的许多特性可直接从序列上分析获得,如疏水性,它可以用于预测序列是否跨膜螺旋(transmenbrane helix)或是前导序列(leader sequence)。但是,总的来说,我们根据序列预测蛋白质功能的唯一方法是通过数据库搜寻,比较该蛋白是否与已知功能的蛋白质相似。有2 ...

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蛋白质液相色谱纯化概论(原创)

第一章 色谱法概论1第一节 色谱法发展简史1第二节 色谱法中的一些术语3第三节 色谱法的分类3一 、根据分离的原理不同进行分类3二 、根据流动相的不同进行分类4三 、根据支持物的装填方式分类5第四节 不同色谱法的应用范围5第五节 色谱图的一些术语6第二章 蛋白质液相色谱纯化概论6第一节 蛋白质纯化的一般目标和方法6第二节 液相色谱纯化前的预备工作7一 、样品的稳定性实验7二 、样品的预处理及保存7三 、评价每一纯化步骤:9第三节 蛋白质色谱纯化技术理论简介9一 、 ...

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蛋白质构象病

蛋白质构象病周剑涛( 黄冈卫生学校生化教研室,湖北黄州 438000 )关键词:构象病;朊病毒;抑丝酶;β-淀粉样蛋白中图分类号:Q51;R373蛋白质结构生物学既从蛋白质一级结构序列,也从蛋白质空间结构及其动态变化去研究蛋白质的性质和功能。生物医学研究表明蛋白质空间构象发生异常变化会引起疾病发生,形成了蛋白质构象病(Protein conformational diseases)这一新的病理学概念。1. 蛋白质构象病及其分子构象病理学 ...

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【分享】吐血奉献系列3—共享56资源

56邮箱免费共享资源整理:croninszl@56.com 生物学mrelite@56.com 化学物理学方面lfang_79@56.com 化学方面wustliang◎56.com 物理相关penicilinum 生命科学-医学方向hwzgj-bio@56.com 生物学wmgkgx@56.com 材料化学wmgkgx1@56.com 特典系列cell01@56.combioskgher@56.com cell杂志文献yanguoliuhen@56.co ...

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HUPO 3rd 第三届国际人类蛋白质组大会

HUPO 3rd第三届国际人类蛋白质组大会蛋白质组学——基因组的诠释大会组织委员会主席贺福初(中国) 共同主席Samir Hanash (美国)John J.M. Bergeron (加拿大) 秘书长孙建中(中国) 副秘书长徐天昊(中国)雷霆(中国) 委员会成员John J.M. Bergeron (加拿大)杜生明(中国)Samir Hanash (美国)贺福初(中国)马林(中国)马阳(中国)Matthias Mann (丹麦)Young-Ki Paik (韩国)Emanuel Petricoin (美国)P ...

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【转帖】Western Blot 实验过程

转至于http://www.51protocol.com/pro/WesternBlotting/20071031/38742_2.html初涉WB,与大家一起学习:)样品处理  由于蛋白酶抑制剂可影响蛋白定量,且新鲜蛋白很少降解,故可不加,如加按建议比例即可。提取磷酸化的蛋白还需加Na3VO4 0.1mM及NaF 25mM)。  注意SDS终浓度勿超过10%。对于心脏,肌肉等碎屑较多的组织可用5%的SDS,肝肾等组织2%即可。培养的细胞(定性) ...

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【转帖】llllcjchina做磷酸化蛋白wb的经验

1.一定要在lysis buffer中加入蛋白酶抑制剂,还要加入一定量的磷酸酶抑制剂,否则即使band压出来也会很浅,结果也不可信。2.加一抗后最好4度过夜,保证抗体有充分的结合时间。因为磷酸化的蛋白只占总的蛋白量的极少部分。4度也可使一抗重复使用多次。毕竟磷酸化的抗体都挺贵的。二抗则室温1小时即可。3.磷酸化抗体的好坏是一个关键因素,所以要选择好的厂商。个人认为,Cell signaling公司做的磷酸化抗体不错,尤其 ...

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【资源】Western bloting 综述

摘要:本文主要是针对Western bloting的原理及操作进行了简单的阐述,Western印迹法是利用抗原抗体的免疫反应,先将蛋白通过SDS-PAGE电泳分离开来,然后再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体(NC膜)上,然后再加抗体形成抗原抗体复合物,利用发光或显色原理将结果显示到膜或底片上。同时对Western bloting在实际操作中应注意的细节问题进行了归纳以及与其它免疫技术就抗体检测方面进行了比 ...

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关于蛋白质纯化的总结!!

下面是本论坛的关于蛋白质纯化的文章,整理如下:蛋白质复性后进一步纯化时,加入氯化钠即会出现沉淀,怎么办?http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/136508_0.html蛋白质纯化方案http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=1100586&sty=3&keywords=%B5%B0%B0%D7%D6%CA+%B4%BF%BB%AF蛋白质纯化、HPLC制 ...

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【资源】毕赤酵母表达系统资源汇总(转帖)

http://www.helixnet.cn/bbs/thread-13191-1-1.html 高效表达外源蛋白的方法 growth-associated方法(08.11.27更新)http://www.helixnet.cn/bbs/thread-4127-1-1.html 毕赤酵母表达的一般策略第一章毕赤酵母表达的一般流程第二章毕赤酵母表达实验步骤第三章阳性重组子的初步筛选第四章对得到阳性菌株的诱导培养http://www.heli ...

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【资源】SDS-PAGE电泳的原理及浓缩胶浓缩样品的原理(甘氨酸的作用)

做了这么多的电泳一直都是闷着头做,今天突然意识到堆积胶和分离胶pH不同,不知为何。以下内容为转载。SDS-PAGE电泳的原理及浓缩胶浓缩样品的原理(甘氨酸的作用)SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)是目前最常用的分离蛋白质的电泳技术。下面就SDS-PAGE的基本原理做简单介绍。SDS-PAGE电泳的基本原理?SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS, SDS能断裂分子内和分子间氢键 ...

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