大家好，课题是结肠癌甲基化方面，我想先把DNA ,RNA和蛋白质提取出来保存，以下是我的初步方案，请大家不吝指教,谢谢哦！RNA 抽提1.匀浆处理将组织在液氮中磨碎，每50～100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10%2.将匀浆样品在室温（15～30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。3.每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。4. 4℃ 1200 ...
关于REAL-TIME引物设计和探针选择， 附有三种常用探针的介绍网址，希望对大家有用1.The design step: the selection of PCR primers and probes2.Choice of detection method (SYBR Green or a fluoresent nucleic acid probe) for the real time PCR.Generally, real time PCR with SYBR green is used to optimize primers and is principa ...
欲通过RT-PCR检测一种基因的不同剪接异构体表达情况，在文献(cancer research, oncogene)中查到的两对引物序列如下：P1 5' atg agg atc cca tgg gcc agc a 3'P2 5' aag ggc ttt tca ctt gtt tta c 3'P1 5' atg agg atc cca tgg gcc agc a 3'P3 5' aag ggc ttt tca cct gta tga g 3'RT用的是MBI的试剂盒,反应体系20ul：总RNA 4.0 ug, oligo 1 ul,M-Mulv 1 ul,反应条件为70℃5分钟,37℃5分钟,42℃60分钟,70℃1 ...
理论上应该扩增出超过2kb的片段，但每次得到的PCR产物都只有700多bp，跟这个基因的cDNA长度类似。换过好几个模板，得到的结果都相同。上游引物：CATGAGCTACATCAATCTGCCC下游引物：AGTCCAACCTGGGTAGGAGGenebank上查到的序列：小鼠胸苷激酶（tk）基因M684891 ccatggcaga tccggaggga tggtcgagct ccaggctttt cacgtagctg agaggt ...
RT-PCR引物序列 基因来源 引 物 序 列 产物大小（kb）β-actin 人 有意义链CCTCG CCTTT GCCGA TCC 反义链GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62 kbβ-actiundefined 大鼠 有意义链TACAA CCTCC TTGCA GCTCC 反义链GGATC TTCAT GAGGT AGTCA GTC 0.62kbβ-actin 小鼠 有意义链GTCGT ACCAC AGGCA TTGTG ATGG反义链GCAAT GCCTG GGTAC ATGGT GG 0.49 kbGAPDH 人 有意义链 GGTGA AGGTC GGAGT CAACG ...
Real-Time RT-PCRhttp://www.ambion.com/techlib/basics/rtpcr/by Subbu Dharmaraj, MSRT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction) is the most sensitive technique for mRNA detection and quantitation currently available. Compared to the two other commonly ...
实验要求为：用实时荧光定量PCR检测损伤前后大鼠某一基因的表达变化，选用Taq man法，从ncbi中查到基因cDNA序列如下：（基因编号：NM_053613）1 atgaagaggg cgtcctccgg aggaagccgg ctgccgacat gggtgttatg gctacaggcc61 tggagggtag caacgccctg ccctggtgcc tgtgtgtgct acaatgagcc caaggtcaca121 acaagccgcc ccca ...
因为之前有个帖子，邮箱中的资源被不良的人删掉了，所以特发此贴。rayfile地址：http://www.rayfile.com/files/098fe2ee-891e-11dd-9cdc-0014221b798a/不会下的可以留下邮箱号我发给你。Publisher: Humana PressNumber Of Pages: 431Publication Date: 2007-08-02ISBN-10 / ASIN: 158829725XISBN-13 / EAN: 9781 ...
请人测了一株菌株的16SRNA序列，给了两段序列。使用Blast 分别检索后，结果不能确定到种，因而想用完整的序列进行检索，由于我不太熟悉序列分析，请朋友帮我看一下这两段能否组成一个完整的序列。1205013.S1.1541RCCTTCGATCGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCCAATCATCTGTCCCACCTTAGGCGGCTGGCTCCAAAAAGGTTACCCCACCGACTTCGGGT ...
帮朋友发个帖子，他刚进实验室，PCR实践技术还在摸索中，找了以下这些文章来学习，不看不知道，一看吓一跳，这些用Real-PCR做出来的研究好些都发了不错的杂志，影响因子都比较高的，可惜我这边没有权限下载全文，哪位朋友帮帮忙，下载几篇全文吧，本人不胜感激！！！1. 标题: Quantitative analysis of cell-free Epstein-Barr virus DNA in plasma of patients with nasopharyngeal car ...
1.PCR引物序列来做原位杂交的探针序列http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=464691&sty=3&keywords=%D4%AD%CE%BB%D4%D3%BD%BB%B5%C4%CC%BD%D5%EB2.设计原则http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2339929_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive ...
下面是我设计的引物的BLAST结果，请大虾帮我解释一下。我这对引物做PCR是否有问题？谢谢。Query=(40 letters)Database: All GenBank+EMBL+DDBJ+PDB sequences (but no EST, STS,GSS,environmental samples or phase 0, 1 or 2 HTGS sequences)2,862,112 sequences; 12,768,194,998 total lettersIf you have any problems or q ...
我要做一个RT-PCR看看PEDF在组织中的表达在uni-sts里找到PEDF的STS请问是否可以直接拿Forward primer: AGAACAAAGATGAACGGTCGGTReverse primer: ACCAACTCTTTGCAGGACATGA来做RT-PCR的引物？如何验证？谢谢http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/sts/sts.cgi?uid=211288UniSTS:211288 Li ...
以前对real-time了解并不多，但是现在工作需要，必须熟悉AB的定量产品，因此对其网站深度挖掘了一番，收获颇丰，给大家贴出来一起进步。总的来说AB的各个地区网站中，个人感觉tw地区的最好，pp的台湾mm，让你的学习体验非常有感觉，请大家点击感兴趣的课程，简单注册后即可免费在线学习，蛮好的哦！Real-Time PCR 原理http://www.appliedbiosystems.com.tw/webinar/reg_rtpc ...
1.重组PCR原理http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/1263309_0.html2.是直接以初次PCR扩增产物作重叠延伸，还是电泳后切胶回收后再做http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5540543_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/thread/4745715http://www.dxy.cn/bbs/post/vi ...
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=3226158&sty=1&tpg=14&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=3225948&sty=1&tpg=14&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=3223640&sty=1&tpg=14&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/ ...
预扩增包含8344位点的序列：8101 agatgcaatt cccggacgtc taaaccaaac cactttcacc gctacacgac cgggggtata8161 ctacggtcaa tgctctgaaa tctgtggagc aaaccacagt ttcatgccca tcgtcctaga8221 attaattccc ctaaaaatct ttgaaatagg gcccgtattt accctatagc accccctcta8281 ccccctct ...
Technically SpeakingAccess RT-PCR SystemBy Patrick BurkePromega CorporationTranscription of RNA from DNA is the principal step in executing a cell's genetic program. Numerous techniques have been developed to investigate gene expression at the level of transcription, incl ...
各位都知道，提取到质量良好的RNA（包括总RNA和mRNA，以下同）是非常困难，关于RNA的提取技术，我就不说了，为什么呢？或许各位非常关心呢，我是这样想的，我可以看到的资料或者是厂家的说明书，各位也同样可以看到的，内容当然都是一样的了，所以实验做的好不好，主要是心的投入多少的问题，所以希望大家自己多多思考啊！提取技术虽然不说了，但是我可以告诉各位如何准确确认RNA质量的有效方法（可能是最简单而有效的，如果你已经知 ...
PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。因此，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构，就要避开它。如这一段不能形成二级结构，那就可以在这一区域设计引物。现在可以在这一保守区域里设计一对引物。一般引物长度为15~30碱基，扩增片段长度为100~600 ...
