样品处理及保存（极为重要）1、悬浮细胞样品：把细胞及培养液一起收集到15ml或者50ml离心管中，1500rpm离心3min，弃去上清；加入10ml 冷PBS轻轻吹打，1500rpm，4℃离心3min，弃去上清；反复2次；第二次弃去上清后，用1ml 冷PBS重悬细胞，移入1.5ml微型离心管，2500rpm（500g），4℃离心5分钟，尽量去除所有残留上清，于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况下，一般保存1年，建议尽快检测。 ...
仅以此贴回馈园子这两年对我的帮助我养树突状细胞一年多了，终于有点东西可以回馈丁香园带给我的帮助。第一：淋巴细胞分离液一定要好，进口的PolymorphPrep（Axis-Shield）很不错。这个分离液可出现白雾状的两层 上面的是单核细胞层下面的是多核粒细胞层，上面的就是含有我需要的DC前体细胞。第二离心力的问题：分离步骤450离心力 洗涤步骤400离心力。这个可以减少血小板。第三：关于细胞少的问题：经过我多次分离血，发 ...
生物通 报道：来自美国弗吉尼亚州立大学，斯坦福—伯纳姆医学研究所（Sanford-Burnham Medical Research Institute）发现了吞噬细胞线粒体膜蛋白Ucp2在细胞吞噬中的重要作用，这对于解释为什么吞噬细胞能接连消化多个凋亡细胞，而不影响其自身活动具有重要意义。这一研究成果公布在Nature杂志上。成人每天能产生大量的凋亡细胞，比如大脑中的神经元，能存活下来的并不多，大部分都被吞噬细胞清除了，但是当 ...
应助后请跟贴说明并将应助的帖子连接附上以便加分。GOOD LUCK!【求助】人胃癌BGC－823细胞相关抗原的表达【求助】大鼠急性脑片培养后将该脑片制成石蜡切片的具体方法 【求助】大鼠的T淋巴细胞亚群的正常值 【求助】原代神经细胞免疫化学染色 【求助】胶体金免疫组织化学 【求助】恶性黑色素瘤免疫组化过程中如何进行脱色和预防脱片 【求助】大鼠MCP-1免疫组化 【求助】作免疫组化时噬菌体的滴度 【求助】肾癌做免疫荧光染色常用的标志物 【求助】小鼠小脑 ...
一、非特异性染色的主要因素组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点：（1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。（2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。（3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如Forssman氏抗原），可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。（4）从组织中难于提纯抗原性物质，所以制备的免疫血清中往往混杂一 ...
ELISA讨论区：【请教】关于测小分子抗原时c18柱纯化 【请教】一个辅助噬菌体Ｍ１３－ＫＯ７的问题【求助】如何降低Elisa检测中的交叉反应【求助】武汉意德生物公司elisa试剂盒如何【求助】ELISA试剂盒询问【请教】在直条图中如何作出P/N值的曲线图【求助】竞争ELISA抗原保护剂的选择其他试验讨论区：【请教】关于autologous MLR中，一个问题【请教】关节局部温度 【请教】关于噬菌体肽库试剂盒 【求助】哪里能做低温包埋 【请 ...
良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果，因此，要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技术员和病理医生密切配合、相互协调、共同努力才能保证做出合格的免疫组化切片。虽然免疫组化染色可以存在各种各样的问题，但从染色的结果看，一般可分为两类：无色片（即无阳性信号）和“杂音”染色片（有阳性信号）。一、 无色 ...
二步法：EnVision SystemEnVision显色系统是将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体（即EnVision）直接放大信号40-50倍，把传统的二抗、三抗分别孵育合为一次孵育。特点：敏感、省时、方便、背景低（避免了内源性生物素干扰）。EnVision工作程序：1） 脱蜡、水化组织切片。2） 预处理组织切片（据一抗具体说明而定）3） 蒸馏水漂洗，置于TBS中。4） 阻断内源性过氧化物酶（仅用于EnVisionTM/HRP） ...
免疫组化问题及解决办法1、染色过强原因 解决办法抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长降低抗体滴度（一般指浓缩性抗体），抗体孵育时间：室温1小时或4℃过夜孵育温度过高，孵育温度超过37℃一般室温20-28℃DAB显色时间过长或DAB浓度过高显色时间不能超过5-10分钟，以显微镜下观察为准2、非特异性背景染色原因 解决办法操作过程中冲洗不充分每步冲洗3×5组织中含过氧化物酶未阻断可再配置新鲜3%H2O2封闭，孵育时间延长组织中含 ...
在现代生物医学研究及临床应用领域，酶联免疫吸附检测术（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）的使用越来越广。在免疫学研究中，常见的ELISA应用包括检测体液或培养液中抗原（如细胞因子）或抗体的浓度。虽然ELISA技术的操作流程因具体实验目的不同而有差异，其基本思路均是先将已知抗体（或抗原）固定于酶联反应板上，利用抗原-抗体特异性结合的特点，使待检测样本中相应的抗原（或抗体）联结在酶 ...
ELISA中常见问题及解决方法ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将 ...
ELISA技术的-操作要点 优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。4.1 标本的采取和保存可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清 ...
ELISA即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。Engvall 和Perlmann于1971年最先应用该法进行了IgG定量测定，并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。 ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③测定时将受检 ...
2006年五月份ELISA检测相关帖子总汇做ELISA设置复孔的意义http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=6097268&sty=1&tpg=21&age=0ELISA TMB配方http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=5538863&sty=1&tpg=21&age=0兔抗APC抗体与APC抗兔抗体有什么区别？http://www.dxy.cn/bbs/ ...
ELISA检测系统可谓是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段。可是在新老手操作过程中总是会出现或大或小的问题,本人在刚开始做ELISA时就面临很多困难,虽然有师兄师姐铺路,但还是常常做得一塌糊涂,比如说花板,假阳性,全显色,全部显色,显色比空白还低......自己也为此苦恼过很长一段时间,随着自己技术水平得提高,或多或少地也掌握了ELISA体系的脾气,也是熟能生巧吧,现在做方阵,做ELISA已是轻车熟 ...
ELISA原理与分类1. ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶 ...
一、免疫荧光组织化学技术的发展史概述免疫荧光组织化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，是由Coons和他的同事(1941)建立，免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞(或组织)化学。它与葡萄球菌A蛋白(SPA)、生物素与卵白素、植物血凝素(ConA等)相结合拓宽了领域；与激光技术、电子计算机，扫描电视和双光子显微镜等技术结合发展为定量免疫荧光组织化学技术；荧光激活细胞分类器Fluorescin acti ...
石蜡切片免疫组化染色步骤1、载玻片的处理：抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。为保证试验的正常进行，可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂，对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下：1.1 APES：现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中，停留20~30秒钟，取出稍停片刻，再入纯丙酮 ...
免疫组化是一项简单而常用的实验技术，但要想获得良好的染色结果却也不是很容易，影响染色结果的因素有很多，现就我的实验过程总结如下：一．抗原修复 组织在福尔马林或其它固定液中固定会引起位于蛋白或蛋白间的亚甲基桥的桥连,引起许多抗原决定簇被封，抗原修复以暴露抗原决定簇十分必要。足够的抗原修复是影响免疫组化染色结果最重要的因素,有时候甚至较检测系统更为重要。如在组织切片前未进行某种形式的抗原修复,免疫染色果将不能令人满 ...
免疫组化常用方法二步法：EnVision SystemEnVision显色系统是将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体（即EnVision）直接放大信号40-50倍，把传统的二抗、三抗分别孵育合为一次孵育。特点：敏感、省时、方便、背景低（避免了内源性生物素干扰）。EnVision工作程序：1） 脱蜡、水化组织切片。2） 预处理组织切片（据一抗具体说明而定）3） 蒸馏水漂洗，置于TBS中。4） 阻断内源性过氧化物酶（仅用于EnVisi ...
