licanming 请问有无人将AKT用作处理因素的，即将AKT作用于细胞后检测下游分子的变化，或者有无看过相关的文献啊？怎么确定用量和作用时间？licanming 是不是没有人会这样做的？或者说这样做是行不通的？再请问大家有无AKT的激动剂，能够激活细胞内的AKT活性？wangke80 我也想了解，包括erklicanming 我看过有些文献是用转染的方法将带有激活型的AKT转到细胞内，让AKT持续高表达，但这样做比较麻烦 ...

hhyy601 如果用分子生物学对一蛋白在转录水平上是升高，在蛋白水平下降，说明什么问题？怎么解释？zjubell 1.首先证明你的实验做的没错。（你基因水平是怎么检测的，蛋白水平是怎么检测的）2.你做基因水平时，做的是全转录本的检测，还是只检测了一小部分，比如3末端。因为有一些基因会有多种转录本。3.考虑一下是否有其他修饰，如甲基化，糖基化，以及3‘，5’端的增强子之类的。我觉的问题出在1,2的可能性最大。naobeir 是单纯的 ...

zhanghaopeng 大家是按照什么浓度稀释、给药的呢？zhanghaopeng 自己顶一下吧！doctormy DAPT在体外的应用浓度从50 nM至50µM 不等，要根据细胞类型，作用时间等因素综合考虑，最重要的是参考文献，要有据可依。通常DAPT用DMSO溶解配置成10 mM的 stock solution ，溶解后保存在−70°C ，并在1个月内用完。zhanghaopeng 好的，谢谢啦！elegance_janet 请问DAPT是否可以通过血 ...

jeremyking 前几天订购了FLUO-4 AM, 因为五一放假，同事就放到4度的冰箱中了，第二天才知道这个事。不知道还能不能用，请各位指教，不然要重新定试剂了。谢谢jeremyking 自己顶一下，希望有人知道答案moxucheng 可以用，没问题本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

trick 现在大部分的文章做到PKC的活化都是通过western检测磷酸化，这个我也做过，但是不太明显，所以想从pkc转位这个角度做它的活化研究。。但是看了一些文献和综述，conventional pkc和novel pkc这样检测他们的活化都是没有问题的，但是有的综述上说atypical pkc的活化是不发生转位的，因为它相对与前2者缺乏一个佛波酯激活域，但是我也看到一些文献做atypical pkc的活化也是通过做他的 ...

vacancy 用刺激物刺激引起某个细胞因子的激活，克隆它的启动子到荧光素酶报告质粒上，实验证明有10倍以上的激活。但是用荧光定量（相对）却检测不到它RNA的表达变化。请问大家有什么调控机制参与到其中，有的话怎么验证呢？tonycat 荧光报告系统的实验是证明了该刺激物能激活该细胞因子的转录，但如果该刺激物同时会加快该细胞因子RNA降解的话，可能会出现上述情况，所以它的时间效应你要看一下summityoung 荧光素酶 ...

紫苑宝贝 总ERK在哪买？我在santa公司只看到有erk1、erk2和erk5，但没有erk啊？是不是用erk1+erk2来代替啊？2006010035 这个公司的，我用过比较可以p44/42 MAPK (Erk1/2) Antibody #9102www.cell signaling .com无名mm 我也用的cell signaling ，有结果。紫苑宝贝 谢谢两位，有多余的可转让吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验 ...

magichunter 最近做的实验是关于ROS诱导线粒体膜损伤，然后细胞色素c外流，BCL-2,BCL-XL表达减低，caspase-3，PARP被激活，最后导致细胞凋亡的这个通路。但是同时我也做了MAPKs(pERK,pJNK,pp38)的表达，发现也有统计学变化差异。请问是否可以将这两个通路写进同一片文章呢？怎样表述二者之间的联系呢？MAPKs是否作用于ROS通路的上游？请高手指点！chuckdouble magich ...

残夜寒馨 各位战友有做FKHRL1的没有阿？请教下做Western 用哪个磷酸化位点好一些呢？Ser 还是Thr好一点呢？谁有什么建议没有。。多谢了！！cstchina 能不能告诉我您做哪方面疾病或模型的研究，或许我可以给您一些推荐！即便您要检测SER也要几个不同的位点需要鉴别。cstchina 能不能告诉我您做哪方面疾病或模型的研究，或许我可以给您一些推荐！即便您要检测SER也要几个不同的位点需要鉴别。残夜寒馨 检测应激后海马的这 ...

圈子圈套 各位前辈，同道!小妹想做关于wnt通路抑制家族基因，如sFRP家族，DKK家族甲基化在肿瘤发生发展中的作用。关于这方面看了些文章，还是有很多地方比较不解，请大家帮忙指点一二!1.非磷酸化形式的bata－catenin是wnt signaling pathway的关键分子，我想问的是如果免疫荧光没有检测出batacatenin的定位异常，或者western没有检测出其活性形式表达量增多，是不是就能说明wnt途径在 ...

allforcell 刚做的一个实验：用insulin刺激PI3K失活的细胞后，然后做WB， 发现P-AKT水平受到抑制，而且P-ERK的水平也有所下降。这是不是由于insulin不能直接激活ERK，而是由PI3K通路激活？？谢谢cstchina PI3是可以活化ERK的！具体可以看下图。allforcell Thanks, but my question is can insulin active ERK directly.本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的 ...

renzhongrenfeia 小弟研究药物体外干扰肿瘤细胞增殖过程中，发现磷酸化Akt表达可被抑制，但是随着作用时间延长，表达水平反而增强，重复实验，结果还是一样！内参一致！请教各位大侠，这种情况该如何解释？有没有遇到或者文献上看到类似情况的？请多多赐教！不甚感激！zfv2007 the phenomenon was observed several years ago, may be a feedback exists in the regulation of phospho ...

caga 我是临床的研究生，想做PP2A的课题，哪个强人给点意见，谢谢chuckdouble caga wrote:我是临床的研究生，想做PP2A的课题，哪个强人给点意见，谢谢这个问题太抽象了，不明白你想做什么。katerlisa 我也要做这个方向的课题，以后多交流本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

quweiquwei 为便于学习和以后写作，建议xdjm们总结一下microRNA的大事，格式可以这样：1。1993年，Lee等人首先在秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)体内发现了长度为22 nt的非编码小RNA——lin-4,而lin-4 RNA便是现在所熟知的miRNA文献：Lee R C, Feinbaum R L, Ambros V. The C. elegans heterochronic gene lin-4 encodes small RNAs with ant ...

zhaomingong 本人正在进行一种物质的研究，该物质可以进入作用于特定基因的启动子序列，抑制顺式或反式作用因子与启动子序列的结合，从而影响该基因的表达。现在两个问题请教各位大侠：1、不同类型的细胞（比如内皮细胞和血管平滑肌细胞）的同一种基因的启动子序列是不是同样的结构，即一、二、三级结构是不是都是一样的？2、不同类型的细胞（比如内皮细胞和血管平滑肌细胞）应该有着同样的核染色体，那么为什么在同样的刺激因素作用下（ ...

jxh2004 各位同仁,不知道有没有泛素化或者SUMO化的特异性的抑制剂，希望各位高人指教一下！！我的email：biojxh@gmail.comzqyang703 MG132就是泛素化抑制剂，文献中常用。yuecaixia11 Lactacystin是蛋白酶体抑制剂amyjet123 艾美捷的SUMO化蛋白纯化检测试剂盒挺好的，我是同济医院的，一直用的都挺好的！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷 ...

shao74 最近在做细胞凋亡方面的实验,碰到的问题是手头上的细胞系对凋亡不是很敏感,所以不知哪位有更好的建议,谢谢!freecell 这个不好说啊，看你主要做哪个组织的细胞凋亡,什么因素引起的细胞凋亡。Fasta921 所以要自己筛选敏感的细胞株啊，不同细胞系对同种基因或药物的耐受性不一样的。goldendoctor Hela 是比较常用的，你可以试一下本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法 ...

wywdxfsh 请问有没有什么网站可以分析microRNA在物种间的保守性？谢谢哈freecell see: www.scichina.com:8082/sciC/CN/article/downloadArticleFile.do?attachType=PDF&id=411501wywdxfsh freecell同学 你介绍的这篇文章写得真好 让我对课题原有的思路产生了新的想法 谢谢！myskite 看不到啊！liqiangs freecell wr ...

Laurologist 请问有人做EZH2和E2F相关研究的吧？是否可以提供关于EZH2和E2F的信号通路图片，谢分享！liaofengnan 请问楼主要的是不是这两个，希望可以帮到你idczlsq 能否问一下楼上图片出自那篇文章，谢啦本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

杜明斗 想劳驾老师(教授\专家\研究生)为我解除困扰,即"Ca2+/CaMK"与"CaMK"这两个缩写含义有差别吗?如有差别,那差别是什么?我知道前者叫"钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶",那么后者中文名称是什么?现正在做的事被这问题卡着壳,求援！求援！！求援！！！感谢！感谢！！感谢！！！liuyk100 Ca2+/CaMK 是Ca2+和CaMK 的复合物，二者结合可以激活下游的MLCK（肌球蛋白轻链激酶），后者使肌球蛋白轻链（MLC）磷酸化，细胞收缩。请问你 ...