【求助】关于PKC活化的问题

现在大部分的文章做到PKC的活化都是通过western检测磷酸化，这个我也做过，但是不太明显，所以想从pkc转位这个角度做它的活化研究。。

但是看了一些文献和综述，conventional pkc和novel pkc这样检测他们的活化都是没有问题的，但是有的综述上说atypical pkc的活化是不发生转位的，因为它相对与前2者缺乏一个佛波酯激活域，但是我也看到一些文献做atypical pkc的活化也是通过做他的转位的，就很困惑。。。。

回头又去看了看综述，发现似乎所说的转位特指的是PMA或DAG刺激活化的转位，也许不包括其他的形式引发的活化？？？:?):?):?)

还有一点就是PKC活化转位到细胞膜上它是通过C1区结合在一些脂类分子上么？或者是其他的形式？？？:?):?):?):?)这个过程是很短暂的么？？？
最后是关于活化转位的检测，有的文章是活化后细胞固定打孔加抗体，然后在荧光或者是共聚焦显微镜下观察，也有的是做活化后提取细胞的膜蛋白和胞浆蛋白然后western检测下相应PKC的量的差异。关于后面的方法有的文章是提取cytosol和particulate fraction然后检测，particulate fraction与膜蛋白具体有什么区别？？？

最后还有个问题就是有没有很好的膜蛋白的western内参可以用？？？

问题有点多了，等待高手解答了。
先谢过。

继续等待高手的解答。。。。

还是没有人回答啊，汗了。。。

不论是经典型还是新型PKC，我师姐都是用转位来判断其活化的。她分别提膜蛋白和胞浆蛋白，都用的actin做内参

cgaoy121 这里面还涉及转位吗？我想请教各位究竟怎么测PKC啊，在无法确定分型的情况下

磷酸化和转位是判断PKC活化的两种方法，不是吗。用WB测PKC，转位的话就提胞浆胞膜蛋白，用某一亚型的PKC抗体检测，磷酸化的方法就提总蛋白，用磷酸化抗体测磷酸化水平

还可以用PKC的 报告质粒检测FRET变化啊，也很经典的

放射性受体配体结合试验也是一个非常灵敏的测定PKC转位的方法，只是需要同位素标记的佛波酯，还是买的到的。我有这样一篇文献，需要的话上传给你。不过还是没有解决你的问题，你问的的确很深了，我也非常感兴趣这个问题，期待高人回答。

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