myskite miR在宿主基因中表达方向有正有反，那么，构建表达载体（miR前体）的时候，方向的正反有关系吗？吴佰霖 miR在"宿主基因"中表达方向 相同的话，这个miRNA与宿主基因一起转录，很可能共用同一个promotermiR在"宿主基因"中表达方向 相反的话，个人认为这个宿主基因不是该miRNA的宿主基因，是重叠基因，这个miRNA也就成为一个反义RNAmyskite 看过文献，miR在"宿主基因"中表达方向 相同的话，这个mi ...
yuanxia84 :)各位前辈好，本人是分子生物学的初学者，刚接触DNA突变方面的实验，想请教各位前辈，如何有效地发现DNA新的突变位点，恳请各位前辈不吝赐教。非常感谢！！zjubell 要发现新的，测序是唯一的方法。yuanxia84 请问有哪些测序方法，哪些方法即简单又高效，还成本较低，谢谢zjubell yuanxia84 wrote:请问有哪些测序方法，哪些方法即简单又高效，还成本较低，谢谢如果你知道大概位置，就直接提DNA， ...
yuanxinke 请问MicroRNA前体和mimic试剂盒有什么区别吗，现在国际上主流是使用哪种？谢谢！zhujoker 效果都是一样的，都是瞬转后能够表达成熟的miRNA。至于哪个是主流，这个就要看你的实验具体而言了，有的miRNA的mimic工作效果不好，所以有瞬转的前体了。仅供参考！路得自己走 跟着版主，再回一条！我们实验室做过mimics和基于质粒过表达miRNA前体序列，个人比较喜欢后者（还不知道是否可以转染 ...
fanxiaochou 请教：CONSTANS(CO）是什么？谢谢slytjiaofei CONSTANS是一个基因的名字，CO是它的缩写，建议自己先在baidu上搜搜，以下链接可参考以下！！！http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_fdxb200605021.aspxfanxiaochou CONSTANS是长日照途径上控制开花的基因，这个基因的具体信息查不到，想多了解一点。qzhaojing ...
biophysics hsa-miR-3155 is not in our miRNA database.targetscan 5.1新收录的在哪个库可以预测靶基因？freecell 网上预测工具很多，你只有逐个去验证了。http://www.exiqon.com/microrna-target-predictionhttp://www.ncrna.org/KnowledgeBase/link-database/mirna_target_databasebi ...
zqooo 试验中涉及检测某microRNA在组织和细胞中的表达，参照文献第一步须将microRNA逆转录为cDNA,常用microRNA特异的stem-loop引物，如果参考文献由公司合成microRNA特异引物（线性），这种引物是在逆转录试验中自动形成stem-loop，再和microRNA结合，还是在逆转录实验前需要将特异引物转为stem-loop,请战友指教，谢谢。zhujoker 请参阅下帖：http://www ...
tyoutei 我做wb，ECL发光的时候，在发光液里能看到清楚的条带，但每次拿出条带准备压片的时候，条带就消失了，怎么都压不出来，请问是什么问题呢？bianbenjamin 二抗浓度过大，迅速淬灭了tyoutei bianbenjamin wrote:二抗浓度过大，迅速淬灭了谢谢！问题已经解决了，不过是提高了抗原浓度，呵呵！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师 ...
free123 请问各位高人，如果ip证实A蛋白与B蛋白有相互作用，如何研判两者的作用是受体配体的作用还是一般的蛋白相互作用？谢谢！gingivalis 我倾向于不要把 蛋白质之间属于受体配体结合还是其他相互作用区分得如此严密。受体配体原指胞外信号分子（主要是化学小分子）与膜受体之间的相互作用。其特点是特异性，高亲和力，饱和性，可逆性，引发生理反应，比如G蛋白。（胞内受体配体也是同样的，比如核受体）从这几点出发，要区分两（多）个 ...
gaoyongxin 如何给提取的RNA加A尾（poly A）zjubell 先问一下，你有何目的？如果是真核的，提的RNA，一般都带polyA，如果是原核的，那你要加A做什么？gaoyongxin 我提的是血清的RNA 但是后期要做microRNA的qRT-PCRzhujoker 请参考下面这篇文献：PNAS published ahead of print July 30, 2008,doi:10.1073/pnas.0804549105Circulating m ...
husttjmu 各位战友由于条件限制和一点别的原因，组织样本取出来以后不得已在常温下放置了大概30分钟。不知道这样以后，样本是否依然可以用来做免疫组化和免疫荧光呢？对做western blot和RNA提取有多大的影响呢？感谢各位战友的帮助和支持！zjubell 常温下放半小时，对蛋白和RNA基本上无任何影响（当然得看你的需求了），一般情况下的实验都没问题，包括基因芯片和测序。如附图。我对此专门做过测试，RT下放1小时，基 ...
honestrety 各位大大，本人想做DSPP基因在细胞分化前后的DNA甲基化状态的比较，有些困惑还望指教：1.是否应该要做全基因（包括编码区和非编码区）的DNA，还是只做cDNA就可以2.用哪种方法检测为好，个人考虑用重亚硫酸盐处理后行直接测序的方法，不知是否可行？3.引物设计上有什么需要特别注意的？小弟是新人，先在此谢谢各位大大不吝赐教了slytjiaofei 1.DNA甲基化研究的是转录水平对表达的影响，当然要用 ...
pozeta 我做的是梗阻性黄疸的大鼠模型，想要测定模型的肝细胞内钙离子浓度，有什么具体方法呢？希望园子里的前辈指教！！ylhuang0502 这方面的文献，非常多，自己先看看文献，这方面的文献绝对成千上万。常用的Ca2+ indicator如fura-2, fura-4，你如果要测绝对浓度，则需要钙离子标准液，要麻烦一些。pozeta ylhuang0502 wrote:这方面的文献，非常多，自己先看看文献，这方面的文献绝对成千上万。常用的 ...
sakura042 本新手欲研究nfkb引起内皮细胞凋亡的机制：是否通过jnk通路。这是否是一个信号通路串话的问题？我们用特异性抑制剂阻断nfkb后发现jnk活性下降，是否就能说明nfkb促进内皮细胞凋亡是通过jnk通路呢？还需要再阻断或者过表达jnk通路来反证吗？这个问题困扰了我好久，请教各位高手。sakura042 自己顶一下三叶虫 请问一下你是通过什么方法检测NF-kB的活性的?sakura042 我就做western ...
edwardellen 求助！！！本人菜鸟，最近开始接触凋亡相关信号，在HepG-2中做实验，有一点很困惑，HepG-2中的p53是野生型的还是突变型的？还是两者都存在？查了一些资料，有些文章之间表达的意思模凌两可。困惑啊！哪位好心的达人能给我一个确定的答案呢？另外，是否有做p53相关的牛人能告诉我P53在哪些实验用肿瘤细胞系中是野生型的，在哪些是突变型的？谢谢！谢谢！谢谢！doctormy HepG2是p53野生型的。如果你 ...
wxhong 大家好，最近加入了一个课题，由于本人经验很浅，于是上 来向大家讨教经验。我把我们的实验流程写下了，大家帮忙看看，给写建议，谢谢大家对细胞染毒----CCK-8法测IC50-----以 IC50为最高浓度递减对细胞染毒----通过Western blot做目标蛋白的表达量变化----使用重叠PCR法将TAP基因立连上目标基因----构建pcDNA3.1/重组载体----荧光定量PCR和 Western Blot检测组合蛋白的表达-----用TAP法 ...
lyc_urology 本人研一，需要做下调肿瘤细胞系中某一miRNA,并检测下游蛋白变化。但是用什么方法能特异有效地降低某一miRNA呢？Antagomir能用于细胞系研究吗？它与inhibitor比较哪个效果较好啊？除此之外还有什么其他方法吗？下调成功后，还想做MTT,流式细胞仪检测细胞周期，细胞克隆实验等，我应该选什么方法下调目标miRNA呢？恳请前辈赐教啊！Victor001 Ambion antisense inhi ...
yehuanlr 本人是新手，所以说得不专业的地方，敬请谅解！别人建立了cDNA文库，通过对文库的分析，分析了一些新的基因，在数据库中没有发现其同源序列，他只通过RT-PCR确定了这几个新基因在某些组织中转录，就此推断了该基因具有的可能功能。这些功能正好是我所想研究的，所以想研究这些基因。但是我所研究的鱼繁殖周期很长，全人工繁殖几乎还没有实现，而且没有卵子或精子给我做。请问各位前辈，具体我该怎么研究啊！！！敬请指导，十分 ...
dldenglin 求细胞核蛋白提取的试剂配方，及步骤，最好是亲自做过的方法，万分感谢dldenglin 咋没有人理我呢johndxy117 来源不明，貌似是某文献作者传授给师兄的，自己试过几次，纯度很高，在此表示感谢~密度梯度离心法提核蛋白试剂Buffer A: 1.0mM MgCl225mM KCl10mM HEPES(pH 7.5)protease inhibitors 1:200Buffer B: 0.25mM sucrose in Buffer ABuffer N: 1.1mM su ...
手指爱上烟 在下新手，可能这个问题比较幼稚，请路过高手帮忙！中间的序列代表什么？空白和加号有何区别？多谢！！吴佰霖 空白 很明显是两个位置的氨基酸不一致星号 氨基酸不一样，但是化学性质相近手指爱上烟 谢谢楼上的解答，在别处也得到战友的相似解答——两个残基容易相互突变，因此在比对的时候认为它们相似。序列比对是需要打分矩阵的，蛋白质比对请查询常用打分矩阵如BLOSUM62等等你就明白了http://www.uky.edu/Classes/B ...
bailamo27 这个问题可能是因为我基础不好吧，所以一直没弄懂，在研究中DNA/mRNA/蛋白水平的研究有何不同？为什么有些时候用PCR，有时候用RT-PCR，有时候用Western blot？例如，对于某个信号蛋白，文献报道有突变体，即在其某个外显子上有几个氨基酸的缺失，那么要研究这个突变的蛋白的功能应该在哪个层面呢？应该用WB吧，看其下游信号通路蛋白的表达变化？那有的文献又报道下游通路的关键蛋白的mRNA的变化， ...
