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【求助】请教关于cAMP的稳定性

laiy115 各位战友,一直在查关于环腺苷酸热稳定性的文章,可是好像都没有找到。请教大家谈谈cAMP热稳定性的问题,除了在酶作用下会形成AMP,加热情况会怎么样呢?dianaofyezi 一般cAMP都是在体内或者细胞内发挥作用的,所以对于热的研究应该不会很多。fightingwanghong 我也做通路的 是个新手不知您用什么方法测定cAMP的浓度啊?上海中医药的那个试剂盒好用不 先谢谢了wangleisdnu PepTag® N ...

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【求助】请教信号传导蛋白的亚细胞定位

52848454 请问 Akt STAT JAK2 ERK1 这几种信号蛋白属于 胞浆蛋白 还是 胞膜蛋白 ??在线等回复 谢谢ylhuang0502 AKT(包括AKT1、AKT2、AKT3)属于胞浆蛋白,plasma membrane上也有少量(属于磷酸化的激活的AKT),其实有一个(至少)专门的查蛋白定位名为LOCATE的数据库,你可以在下面的网站查查其余的蛋白的定位。http://locate.imb.uq.edu.au/52848454 多谢楼上的朋友fangw ...

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【求助】关于检查抗体的质量问题?

三叶虫 请各位园友,怎么可以检测我买回来一抗和二抗的质量,我之前买了Santa Cruz抗体开始几次还可以做出条带,现在连β-actin都做不出来,现在准备买另外一个公司的,请问有没有什么预实验可以检测我的抗体质量?谢谢各位帮忙。。ylhuang0502 比较快速的方法就是用dot-blot,几个小时就可以看到结果,你可以google一下,网上关于dot-blot的protocol非常之多。good luck!三叶虫 dot-blo ...

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【求助】miRNA芯片数据分析问题

pianpianqiwu812 求助各位老师,近期我做了6张miRNA芯片,实验组3张,对照组3张,公司给我的数据只有相对值,没有P值。原因是芯片数量少,不需要做统计学分析。这种说法是否对?还有就是在计算差异倍数时是用实验组相对值分别除以对照组的相对值,倍数在2倍以上的入选。这样计算是否对,还是倍数计算也是要有相关软件的?我在这方面真是只菜鸟,不懂的很多,公司说的我感到有些可疑。:(zhujoker 这个你在做的时候就应该 ...

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【求助】miRNA的功能研究

lyc_urology 请问前辈,我想调节miRNA后,做MTT,请问怎么保证inhibitor在MTT孵育液中的浓度,购买的inhibitor都是多少多少nmol的量,直接拿培养基配制吗?因为我转染需要的inhibitor的浓度是50nmol。zhujoker 转染后直接检测,不需要在培养基中配制。要不的话你合成的那点足够用吗?heychristy 转染后直接检测,不需要在培养基中配制willion1985 通常 miRNA mi ...

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【求助】下调表达该怎么做

栽好梧桐等凤凰 本人最近用病毒刺激细胞后用荧光定量检测到几个基因下调表达,我的预期效果是要他上调表达的。很多文献报道的是某个基因上调表达后如何做,很少报道下调表达该怎没做,请各位前辈指教下调表达该怎么做。谢谢,提供相关文献更好,谢谢。freecell 你的问题很不清楚。是问下调基本表达的方法还是问怎样检测基因表达是否下调?LoftyMan 一样做,上去了会引起什么改变,下来了又会引起什么改变。比如你发现semaphorin ...

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【求助】求助外显子序列

fangxiang2008 有高手能指点一下图片6个外显子的序列码?或指点一下在什么地方能查到?图来源的文献在附件。fangxiang2008 文献来源,刚才没有贴上去zhujoker 你直接将基因说出来不就搞定了吗?NCBI你查相应的东西都有的。bigbang_0_0 ucscfangxiang2008 基因是二氢叶酸还原酶,缩写DHFR;NCBI查不到外显子。另外请教楼上,ucsc怎么查,不太清楚fangxiang2008 NC ...

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【求助】请问VEGF-2578C/A多态性中2578代表什么意思?

cctj06 请问VEGF-2578C/A多态性中2578代表什么意思?另外,其中的符号“-”代表什么意思?谢谢!zjubell 找到启动子,然后往前数2578位.就是这个位点了.zhujoker 就是在2578位存在碱基的变化,具体形式不太统一。大家在文献中一般用的都是习惯或者说惯用名称。具体表现在以下几种形式:一、突变信息之间加上位置信息主要有三种方式:比如说突变信息之间加上cDNA的位置,如C188T;突变信息之间加上DN ...

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【求助】请教下调表达该怎么做?

栽好梧桐等凤凰 本人最近用病毒刺激细胞后用荧光定量检测到几个基因下调表达,我的预期效果是要他上调表达的。很多文献报道的是某个基因上调表达后如何做,很少报道下调表达该怎没做,请各位前辈指教下调表达该怎么做。谢谢,提供相关文献更好,谢谢。ylhuang0502 这个要相对麻烦一点,一种办法就是用一种或几种下调表达的基因的质粒转染细胞,进行过表达,然后再进一步研究,你可以先查今年的文献,相作者索要质粒,大部人都会给的。祝好运! ...

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【求助】报告基因实验

gene122 本人遗传学准研究生,现在在实验室,看到有报告基因实验,但是不知道这个实验的原理及目的,哪位好心人解释下zhujoker 这个原理已经在这个版块讨论过了,自己学会搜索吧!下面链接有一些初步的介绍:http://www.biox.cn/content/20050411/10190.htm3090547 多多自己动手本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴 ...

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【求助】运用生物信息学怎么反过来预测对某个基因的具有靶向调节作用的miRNA啊?

aning2599 运用生物信息学怎么反过来预测对某个基因的具有靶向调节作用的miRNA啊?zhujoker 其实你说的这块儿还是比较空白的。因为一般说来调节什么的表达是转录因子调控,但是由于miRNA很多位于基因间,所以很多调控无从研究。而很多位于内含子中的miRNA与其目的基因还不受同一启动子调控,所以对其研究还有一条很长的路要走。pianpianqiwu812 全基因组扫描是不是可以,现在不是挺热的吗?就是有点贵 ...

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【求助】关于抗体购买?

三叶虫 大家好,我最近准备做NF-κB信号通路中的P65,P50还有IKK,IκB。请问各位买哪个公司的抗体好,中衫的怎样?望各位多多指教。谢谢!!三叶虫 顶自己一下。。siru1234 你好,建议你买大品牌的抗体,质量有保证,我以前就曾用过abcom和sigma 的抗体,挺好用的。我们公司专门做血清的,如果你有需要可以联系,QQ:1137173658,电话:021-61729873,网址:www.biocando.cndianaofye ...

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【求助】MAPK通路抑制的问题

yy59410 在下在做MAPK通路对皮肤成纤维细胞凋亡诱导的作用,我分别用p38,JNK,ERK相应的通路抑制剂阻断相应的通路后看给药后细胞的情况,发现这些通路的阻断并不能阻断药物对细胞的凋亡诱导,想请教坛子里的高手们这是怎么回事?我接下来需要做什么?希望大侠们赐教。不甚感激啊。chuckdouble yy59410 wrote:在下在做MAPK通路对皮肤成纤维细胞凋亡诱导的作用,我分别用p38,JNK,ERK相应的通 ...

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【求助】NCBI 胰岛素基因序列 急!!!

baolingbaby 各位前辈,鄙人现NCBI菜鸟一个,现急需胰岛素基因序列以及它各个内含子和外显子的序列,如果能帮我附上图文解说的查询方法更感激不尽,我也尝试从头开始学NCBI但时间太紧了,我还得分析其他数据,各位拜托了,谢谢。我的邮箱是baolingbaby@163.com,结果太大的话可以发到我邮箱里。再次谢谢了yuandong 或许对你有用http://liucheng.name/1048/另外,摸索一下UCSC G ...

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【求助】MTT中盐酸异丙醇的浓度?

wangruimishu 哪位高手知道MTT实验如果用盐酸异丙醇溶解结晶的话,浓度该是多少呢?多谢赐教!!ylhuang0502 酸化异丙醇(0.1N HCL+无水异丙醇)详细步骤可参见:http://www.biotf.cn/read-htm-tid-221-page-e-fpage-1.htmlcyclin 很不错的东西wangruimishu 多谢 ylhuang0502本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实 ...

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【求助】microarray of microRNA

临窗听雪 最近想做microRNA的microarray, 筛选一下细胞经过treatment之后microRNA的表达变化,请问有做过这个的战友吗?这种方法的可靠性怎样?另外哪家公司的比较好?灰常感谢!yanglong ABI的taqman探针 嘿嘿pianpianqiwu812 一定要找一家大公司,而且实现说好后期数据分析的事,要不虽然做了不给做数据分析,相当于只完成三分之一,原始数据没有什么很大的意义,做芯片数据分析最重要 ...

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【求助】关于WNT通路相关的实验设计

liubodoctor 各位信号转导版的老师,牛人,大家好,提前祝大家端午快乐!学生有个问题咨询下大家,我是研一的肝胆外科的研究生,这段时间设计课题,也看了一些文献,实验室的老师建议做做肝癌的WNT通路方面的。WNT激活能够引起相关的MMP cyclinD cd44 VEGF等等相关的细胞增殖和转移的促进。我想的是设计实验阻断wnt通路,以求降低beta-catenin的水平和入核内激活相关癌基因的转录水平。然后检测胞内的磷 ...

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【求助】研究某某基因对指定肿瘤细胞株的凋亡和增值

barin 前期的石蜡IHC结果发现某某基因在指定类型肿瘤中是高表达的。请问用什么指标、方法检测该基因在指定肿瘤细胞株凋亡和增值好呢?barin 看来只好留着自己解决了。ylhuang0502 1. flow cytometry or other techniques to detect apoptosis2. MTT assay for cell proliferationgood luck!barin 谢谢楼上的。chuckdouble barin wrote:前期的石蜡IHC结 ...

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【讨论】想知道microRNA的3‘UTR长度一般都是多少

naturewm 我是刚刚开始要做microRNA,所以很多东西都不是很熟悉,希望大家能够多帮忙。我现在想要克隆一个基因的3’UTR序列到含有luciferase报告基因的载体上,3‘UTR应该是在紧邻ORF下游与polyA tail之间的序列吧,但是这样的话整个3’UTR的长度就有大概1600bp了,是不是太长了,应该选择哪一段比较好?谢谢大家不吝赐教!希望以后能和大家有更多的交流!zhujoker 1600bp不长,可 ...

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【求助】Notch1质粒

polo6892 请问哪个实验室的同学或是老师有Notch1质粒,有点朋友请和我联系下好吗?有事情咨询!多谢!我的EMAIL :zhouwei5352877@163.com,QQ 286358161,我是武汉大学人民医院实验室的研究生!谢谢!liudaifu1997 我也感兴趣,等qinvicky 我们实验室做基因转染的,一直用N2质粒,不过我懂得不是很多~不知能否帮得上你kevinddd 我也需要啊!polo5352877 谢谢,你能把你 ...

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