Rachel1123 各位大侠，我的实验需要用一种抑制剂抑制Stat3的表达，查了merck公司的Stat3 inhibitors产品，种类很多，不知该选用哪一种？chemicals 跟inhibit peptide 有什么区别？谢谢！:)ylhuang0502 对于Stat3我是外行，但是我用过很多种其他的抑制剂，选择的方法和思路应该是一致的。1.抑制剂一般是首先要考虑特异性，自然是越高越好，这Merck/calbiochem网上可以 ...
hujuncas 最近合成回来一批PNA(DNA的类似物,只是骨架不同),因为不能对PNA测序,所以无法判断PNA的序列是否正确.今想到可以用测定PNA/DNA 双链Tm值的方法来验证,因为如果PNA序列有误,则其与互补DNA的Tm值肯定下降.有无大牛给指条明道,哪怕是 DNA/DNA的Tm值是如何测的(包括仪器和操作,以及所需核酸量),也好有个借鉴.另外,可否使用Realtime PCR仪器呢?先谢谢了!:Dsong333 TM for ol ...
jairsa 求助：蛋白长期保存在处于等电点附近的缓冲液中，是否会影响其稳定性呢？freecell 为何有此说法？一般说如果溶液pH值和其本身等电点相近，蛋白质溶液沉淀。xuezhishui 蛋白质要长期保存最好能够冻干以干粉状保存！另外如果要在缓冲液中保存最好应该避免极端pH值缓冲液和近等电点pH值缓冲液；如果由于实验的需要不好避免的话还是分装以后低温保存，每次解冻后即用，避免反复冻融对蛋白的影响！gaolisuo 在等 ...
375308329 我用雷帕霉素50、100、200uM处理了细胞24小时，然后测了个MTT但是一点趋势都没有，想请问有哪位高手做过这个药的相关实验？非常感谢！jz2298 什么细胞？小有 这个药是典型的诱导自噬的chaomindai 单用这个药物处理细胞，在低浓度时对细胞几乎没有影响。我曾用rapamycin 100nM-100uM处理cortical neuron，对neuron影响不大，但在加H2O2的同时加rapamycin ...
华农病毒 朋友们：最近在研究HSP，想设计一些人源的HSP荧光定量引物，不知道从何下手！自己设计的引物各中条件还不确定，想找一些报道的，但是没有找到……希望高手指点交流下！非常感谢！ylhuang0502 LZ的查找方法可能不对，你可以用如下关键词"heat shock protein and real time pcr and human" 在google/scholar查（你可以选2005年以来的较新文献），下面的一篇文献是有关Hsp27， RT-qPCR的 ...
ahuchxq 因为最近作磷酸化的ERK的western ,我用的是Hela 229 细胞，但是比较郁闷的是，这个细胞为什么阳性对照组和没有任何处理的一组都有磷酸化的ERK？是我细胞坏了还是本来这个细胞就是这样？我用Hela 细胞试了下，对照组也有一点，但是明显比阳性对照组弱，293细胞也是。但是就是229细胞没有任何区别，我很郁闷，试了好几次都是这样，因为前期大量实验都是在229细胞上做的，所以不能选其他细胞了。。请求有经验的大 ...
ahuchxq 最近要提取核蛋白，看NF-KB的近核情况，然后做western，师姐用了碧云天的试剂盒，但是提的不好，基本没有提出来，实验室其他人也用过，感觉也不是很好。请教高人指点，提供些经验！谢谢！fangweibin119 ahuchxq wrote:最近要提取核蛋白，看NF-KB的近核情况，然后做western，师姐用了碧云天的试剂盒，但是提的不好，基本没有提出来，实验室其他人也用过，感觉也不是很好。请教高人指点，提供些经验 ...
yh_sunflower 请问为什么NCBI中的同一个蛋白，同一个物种还有好几种不同的序列呢，以哪个为主呢？waterbeijing 你指的是不止一种cDNA的编码区吧很多时候基因转录有不止一个转录起始位点，而转录后会发生多种mRNA的选择性剪接，最终产生不同序列的cDNA甚至不同编码区组合侠骨仁医 yh_sunflower wrote:请问为什么NCBI中的同一个蛋白，同一个物种还有好几种不同的序列呢，以哪个为主呢？同意 ...
huking 小弟最近在做miRNA功能方面的实验，但不知哪家公司的mimics和inhibitor质量会比较好，价格也比较实惠。希望得到大家指点，万分感谢！freecell 做RNA，ambion比较专业。kiss9499 ambion的太贵，我定的上海吉码的，还行，也不贵。madamcurie 做RNA，ambion专业；invitrogen 也挺好；Qiagen 也挺好：国内上海吉码公司比较便宜/politician_137 上海吉玛 ...
zhaojunfeng1983 最近时间太紧，有哪位战友知道那个公司做信号通路（western blot）做的比较好，急啊。 AKT/PI3K方面的selenium 我们是专业性做细胞信号转导磷酸化抗体的，WWW.SIGNALWAYANTIBODY.COM,我们有800余种phospho-specific antibody，AKT/PI3K的很好，欢迎联系我，025-86975628-8012，夏先生，xsk_bio@163.comyun ...
折翼的老鼠 达人，你好，我是一个新手，想问下，我在NCBI上查的基因序列包不包括该基因的启动子？？阿呆硕士 没有。。一般都只有ORF序列即ATG开始TAA(..)结束。。。启动子序列要根据你的基因上下游序列去分析或是自己去验证某基因的上游序列是否具有启动功能。。。但一般对与目的基因的克隆表达研究，用的外源的高效启动子比较多。。。折翼的老鼠 那该怎样查一个基因的外源启动子序列呢？？michaelmichael 折翼的老鼠 wrote:那该怎样 ...
myskite u6序列很多，用哪个都可以吗？detector350 在做microRNA相对定量检测时候，一般选用U6或者5s。myskite 我想自己设计u6的反转引物，嗯，有设计好的吗？detector350 他们那边有的，你可以发邮件询问下kiss9499 没有，直接买的试剂盒yutoubaobao 不少文献都使用U6，我推荐你也用这个。jeff_lee 不要打广告，如果有需要请直接PM楼主！coldage U6，sense：5'-CTC ...
清风重重吹 想合成LNA探针，地高辛标记，哪家公司比较好？zhujoker 这类求助你可以上丁香通，这样会得到更多的信息，每个公司会将他产品的优势告诉你的，然后根据你的要求选择。willion1985 Exiqonbolycc1988 LNA设计合成可以咨询××××本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming
学习勤快 基因的象形文字。IT CTA=1 ist IT ;G=01T10T 00 11C1TTC10T1TC1CCTT0T110TC-+- 0+00 - -C-++C- 0+-+C-CC++0+- -0+C+-，太阳与月亮，这是基因的象形文字。0也可做基因断句断读符号。注：太阳与月亮指G或0，与C，或读圆圈，半圈。+，-指T与A-----第1个英文字母，1T或it化为-+表示。+对-太阳对月亮/读起来更象形（文字。）CT扫描：C是月亮T是+C，T都是嘧啶。G，与C划——代替。本文为《NATURE》1 ...
mnidr Shocked cells were added to 1-ml SOC, incubated 1 h at 37°C, and then one-half was spread onto agar to select CmR or KmR transformants. If none grew within 24 h, the remainder was spread after standing overnight at room temperature. After primary selection, mutants were maintained on medium without ...
xiongye2006 因为只知道我们所做的营养因子可以激活胞内的Akt，另营养因子的跨膜受体已知，我需要寻找一个模块，此模块能启动Akt。我的问题是，哪些位点的何种修饰可启动Akt呢?在此模块中，因为我的跨膜受体胞内段不具备酶活性，是不是还需要寻找一种酶蛋白？xiongye2006 请推荐给我一些 关于 酶作用机理 的资料或电子书ylhuang0502 先查查你的跨膜受体有没有PH domain, 因为AKT要想被激活，必须要靠该dom ...
lsc000211 最近本人的实验课题中，需要用氧自由基诱导细胞凋亡，目前，氧自由基和凋亡均为研究的重要内容，然而通过产生氧自由基达到凋亡的实验文献却很少，我把收索到的内容上传，大家共勉：(1) 巨噬细胞的吞噬作用 当细菌、病毒等异物侵入人体时，若身体不作出任何反应，这些异物会在体内迅速繁殖，导致身体患病；庆幸的是，人体遭到异物袭击时会动员其防御系统(主要是白细胞和巨噬细胞，以下称之为“食细胞“)将异物吞噬掉。这些细胞在不断吞噬 ...
yukituki 最近做Akt的WB遇到了问题：我用的是CST的Akt抗体以及pAkt抗体，染小鼠组织（肝，肾，脾，肺，脑等）。5%BSA（TBST稀释）4度封闭过夜之后一抗是5%脱脂牛奶稀释，1：500，过夜，二抗1：2000稀释，2-3h染出来的片子很脏，而且Akt勉强可以见到，但是pAkt没染出来条带提组织用的是RIPA（每100mg用500ul），加了PMSF以及NaF，冰上操作，裂解1h，4度离心30min，取上清。各位 ...
shuxian1 目前有哪些方法或手段可以提高外源基因在植物中的表达水平？熟鱼片 植物重组蛋白表达现状的一篇综述文章shuxian1 谢谢了本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming
carl97 本人最近想本人最近想研究某药物对凋亡调控的机理，如何筛查出该药物相关的作用通路？？？凋亡有很多的信号转导通路，每一通路中涉及很多的分子。如果要筛查，是不是每条同路的关键分子在药物作用后都要分析其表达的情况？？工作量是不是太大？？有无其它好的分析方法？谢谢！！ylhuang0502 估计你用的这个药物不是全新结构的，是否先查查它的类似物的作用靶点？如能查到，这样有的放矢，工作量就会大大降低。另外如果有钱的话，还可 ...
