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【求助】内含子SNP点 功能研究怎么做啊???急

buloubulou 本人前期试验发现内含子上某一SNP点与干扰素治疗疗效相关,想进一步做相关功能。虽然内含子上的SNP点不导致mRNA、蛋白水平的变化,但内含子并不是完全一点功能没有,比如调控作用什么的。该内含子SNP点的功能研究方向是什么?不知从哪下手, 请教各位大虾啦,急!!:~):~)freecell Refer to this paper:http://jcem.endojournals.org/cgi/content/full/90/5 ...

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【求助】MC1061/P3感受态细胞有何特别之处?

luoqq1985 想请问一下这里有没有哪位会用MC1061/P3这种感受态的?因为我之前常用的是Top10和DH-5a以及JCM109,最近要新做一个蛋白的表达质粒,提示要用MC1061/P3这个感受态。所以我想知道这个感受态与其他的有何不同?实验时需要注意什么?谢谢freecell 这个质粒来自何处?为何要用MC1601/P3这个感受态?luoqq1985 这个质粒是表达人的细胞核内的一个蛋白,不是我自己构建的,是别人 ...

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【讨论】细胞增殖检测方法:EdU VS BrdU

willion1985 直接测定DNA合成是细胞增殖检测的最准确方法之一,是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法,其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物----BrdU进行检测。因为在细胞周期的S期,和细胞一起孵育的BrdU能渗入DNA分子中,再结合BrdU抗体与渗入DNA的BrdU特异性结合,就能够检测到DNA复制活跃的细胞。但BrdU有一大缺点,就是需要变性DNA后才能与抗体结合,但这就破坏 ...

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【求助】细胞的购买

紫藤树 ΙΚΚε缺乏的小鼠肾小管上皮细胞可以买吗,在哪有?朋友们帮忙找一下,急用!!!!ylhuang0502 在ATCC上试试:atcc.orgfindlg atcc不是很会用啊,百度里面搜不出来吗本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:shixiongcoming

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【求助】菜鸟**基因表达谱的相关信息

细胞微管 请教老师,他指点说下一步应该做基因表达谱,这样才“心里有底”,好开展深入研究。但是我不明白,基因表达谱这类的组学研究在科研思路中,例如一个story从刚发现到完成loop的过程中,究竟处于什么样的地位?第二个问题,请教各位老师,基因表达谱的研究结果应该是哪些基因表达增加哪些降低吧?那么从这样的结果中进行信息分析、分类和建立进化树,这些对我来说比较抽象的概念又怎样提示下一步的研究方向呢?灰常感谢!细胞微管 抱歉,因 ...

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【求助】请问MicroRNA与mRNA有区别吗?

haiya116 请教一下,看文献的时候发现MicroRAN有时也叫miRNA,不知道和mRNA有没有区别?是不是指同样的RNA?谢谢!zhujoker mRNA,为 messenger RNA 的简称,或称为信使RNA。mRNA是由DNA经由转录而来,带着相应的遗传讯息,为下一步转译成蛋白质提供所需的讯息。在细胞中,mRNA从合成到被降解,经过了数个步骤。在转录的过程中,第二型RNA聚合酶(RNA polymerase II)从DNA中复 ...

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【求助】关于钙螯合剂BAPTA-AM的负载

cn981 大家好,请问钙的螯合剂BAPTA-AM负载细胞时所用的负载液体是无钙的还是可以有钙的?我的看法:既然BAPTA-AM能螯合钙离子,那么在细胞外也能结合大量的钙离子,如果负载液有钙,BAPTA-AM有一部分会与钙离子结合,然后进入细胞内,这导致了单纯BAPTA-AM浓度的改变,同时也会促使一些被螯合的钙离子借助BAPTA-AM进入细胞,虽然进去以后也是螯合状态。不知道这种看法正确吗?请大家指正。另外,用BAP ...

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【求助】关于caspase-3的活化

olivial 最近想做caspase-3的WB,但关于caspase-3的活化有一个问题一直没弄明白,想请教。在没受刺激前,细胞内的caspase-3以procaspase的形式存在,当受到内外源性刺激时,被活化成异二聚体,该异二聚体由p12和p17两个亚基组成。但procaspase是怎样变成异二聚体的呢?是self-cleavage,还是上游信号如caspase-8、9裂解的?selenium Cleavage by gr ...

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【求助】关于提核蛋白的一些疑问。。。。

ahuchxq 最近提NF-kB的核蛋白,是买的碧云天的试剂盒。一般提核蛋白都是有两个buffer,一个低渗的提胞浆蛋白,一个是高盐的提核蛋白的缓冲液,我想问的是,有没有可以不加核蛋白的buffer 直接把胞浆蛋白提取来后,直接加SDS 裂解液裂解上样做的?谢谢大家提供点信息。。。fangweibin119 ahuchxq wrote:最近提NF-kB的核蛋白,是买的碧云天的试剂盒。一般提核蛋白都是有两个buffer,一个低渗的提胞 ...

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【求助】胰酶和血清是否影响p-akt表达?

olivial 最近想用western blot检测小胶质细胞活化后细胞内p-Akt表达情况(包括时间点),那么提蛋白时可否用胰酶消化的方法?加药前是否要将完全培养液换成无血清培养液?ylhuang0502 Q1. 提蛋白时可否的方法?A1.: 不要用胰酶消化, 贴壁细胞处理后,立刻至于冰上,用PBS洗三次后,直接加lysis buffer裂解提蛋白,lysis buffer的组分可查查文献,或在本版搜一下。Q2加药前?视情况而定,一般不必要加,但 ...

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【讨论】P53蛋白抗肿瘤

whl111 P53蛋白具有肿瘤抑制作用,其机制可能是影响肿瘤细胞的凋亡。各位战友有没有想过如果将P53于体外直接作用于肿瘤细胞是不是会引起细胞的凋亡?而如果想办法让P53蛋白在体内能够接触到肿瘤细胞是不是可以起到抑制肿瘤细胞生长的作用呢?pub_wang 不太可能,其通路在肿瘤发生中已被打破,肿瘤中整个平衡都变了。5米 一颗种子当它还是种子的时候,你把种子煮一下也许再也不会发芽,当这颗种子已经长成大树,你在树边浇点热水 ...

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【求助】如何追踪分子生物学前沿技术

游上岸的鱼 敢问各位大侠:平时都是如何追踪有关分子生物学前沿技术?有没有关于分子生物学技术进展的网站?恳请各位大侠介绍下。。感激不尽!!!freecell 多看看顶级杂志。先进的技术都是从那里总结出来的。游上岸的鱼 :)谢谢freecell斑竹本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:shixiongcoming

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【求助】活性氧检测需要用到什么仪器?

ningwang 我在做关于细胞活性氧浓度的测定,来探讨药物对细胞的保护作用。买的是碧云天生成的活性氧检测试剂盒,但是不知道胞内的荧光用什么仪器可以检测得到,望各位指导。伽利略 流式细胞仪实际上这些问题你可以发信直接问试剂公司。哈啰 激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪都可以的,试剂盒里说明书上有写的,个人觉得流式细胞仪比较好些本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法 ...

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【求助】p85和p-ERK western检测问题

memoday 最近在做一个信号通路的下游磷酸化水平检测,但是做western没有看到任何条带,包括p-ERK,p85。麻烦各位战友帮我分析一下可能原因吧:1.293T细胞转染质粒(带外源基因),24h2.无血清培养18h3.配体(外源基因是该配体的膜受体)激活,37度,10min4.PLB(promega公司)裂解细胞,做western,抗体是SANTA CRUZ公司的p-ERK (Tyr 204),以及cell signaling公司的 ...

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【求助】关于RNA干扰试验分组问题

zhuyuan0099 我看国外文献,在用药物刺激RNA沉默某个基因的细胞克隆时,多数这样分组分组control siRNA+药物组,control siRNA组,要沉默基因siRNA+药物组,要沉默基因siRNA组。其中control siRNA组和要沉默基因siRNA组一定要吗?为什么?请各位老师指点,小弟刚接触,见笑了。freecell 当然需要。control siRNA组:RNAi试验必须沉默基因siRNA组: 你没有加药物时的背 ...

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【求助】请问将含荧光素酶报告基因的质粒转染到真核细胞中,建立稳定的细胞系,用哪种转染方法比较好?中间有什么细节是值得注意的

lsdcfhyj 请教前辈,将含荧光素酶报告基因的质粒转染到真核细胞中,建立稳定的细胞系,用哪种转染方法比较好?中间有什么细节是值得注意的chenjing198345 如果lab经费充裕的话可以用试剂盒包装慢病毒,然后感染真核细胞,完全按照protocol做就行,没啥特别的,sbi的kit不错。如果经费有限,一般是用磷酸钙转染法,这种方法在《分子克隆》里面有介绍,缓冲液的ph值很关键。lsdcfhyj 谢谢,但是我看很多外文 ...

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【求助】发现一种新蛋白,通过CO-IP验证了与已知通路里的一个蛋白相作用,实验接下来应该如何设计呢?

david52511 芯片发现一种新蛋白,前期甲基化,功能实验等已验证其是一种抑制肿瘤转移的基因,现在想研究其信号通路,并已通过CO-IP验证了与一条已知通路里的一个蛋白相作用,实验接下来应该如何设计更有意义呢?ylhuang0502 1. 用另一蛋白的siRNA转染细胞后,看你的新蛋白的抑制肿瘤转移的功能是否受影响,另外,看新蛋白的表达(mRNA and protein levels)是否受影响。2。另一蛋白有无抑制剂或激动剂,如有处 ...

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【求助】求助westernblot实验中的相关问题

songling8205 本人正在做蛋白检测,想知道冻存在-80度冰箱里的标本,在进行蛋白提取前用什么方法解冻,有利于减少蛋白丢失,尽可能减少对实验的影响,谢谢相关人士指导!!急求!!!!fangweibin119 把样品放在冰上songling8205 我通常是放在4度冰箱让它缓慢融化的,可是这样造成分离的单个核细胞呈团块状沉积于1.5ML的EP管中,在进行蛋白裂解时细胞团块不易溶解,我对于这个问题不知道怎么解决?求助大家, ...

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【求助】这种情况下ERK算不算被激活

papa0210 我检测到细胞内 p-ERK 升高, 同时总的ERK也升高,这能说明ERK被激活了吗??谢谢大家了papa0210 谢谢大家了fangweibin119 有做内参校正?papa0210 有,用的Tubulinylhuang0502 做densitometry,然后用p-ERK的灰度值除以ERK,即得到p-ERK/ERK的值,然后再对你的对照归一化(normalization),再看是否升高。这个实验涉及统计处理,所以,n至少要3-4 ...

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【求助】求进化树构建软件

xumin19851019 本人最近需要对一批测序克隆进行进化树分析,但是看文献好像有多种不同的进化树构建方式,不知道哪个软件比较合适?我想构建的是细菌的进化树,哪位高人如有能否发我一个啊?xumin101977@163.com 不胜感激!freecell 参考文献啊,有很多的,例如mega。cz8826720 用mega吧,这个软件是最专业的!yuandong 中低端:MEGA(free)http://www.megasoftware ...

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