【求助】阻断细胞内某一特定蛋白的表达
丁香园论坛
3976
各位大侠,小弟请教一个问题哈~
现在想寻求一方法,特异性的阻断细胞内一个蛋白(暂且叫这个蛋白叫B)的作用。
以下是一些背景:
1.蛋白B是从一个大蛋白(暂且叫作蛋白A)中水解下来的
2.B从A中水解下来是自然现象,水解下来以后呢,A和B都有活性的
3.现在想特异性的阻断B的活性,但是要求是不影响A的活性,所以不能用RNAi
4.如果是用抗体的话,请问抗体能进入细胞核吗?
谢谢各位大侠啦~
现在想寻求一方法,特异性的阻断细胞内一个蛋白(暂且叫这个蛋白叫B)的作用。
以下是一些背景:
1.蛋白B是从一个大蛋白(暂且叫作蛋白A)中水解下来的
2.B从A中水解下来是自然现象,水解下来以后呢,A和B都有活性的
3.现在想特异性的阻断B的活性,但是要求是不影响A的活性,所以不能用RNAi
4.如果是用抗体的话,请问抗体能进入细胞核吗?
谢谢各位大侠啦~
哪位大侠能给予我帮助啊~
有人了解 domain negative 么?
有人了解 domain negative 么?
对你的蛋白认识较少,你查查文献看别人是怎么做的。提出以下想法,仅供参考:
1、可以使用抗体,抗体进入细胞核的可能性小;
2、你提到进核,B蛋白可能是转录因子,可以考虑使用类似于B蛋白的物质作为竞争性抑制剂,可以与相应的靶基因结合而不发挥作用;
3、如果B蛋白进核通过某种通道,选择通道阻断剂来阻止其发挥作用;
4、如果B蛋白通过受体发挥作用,选择其拮抗剂阻止其发挥作用。
1、可以使用抗体,抗体进入细胞核的可能性小;
2、你提到进核,B蛋白可能是转录因子,可以考虑使用类似于B蛋白的物质作为竞争性抑制剂,可以与相应的靶基因结合而不发挥作用;
3、如果B蛋白进核通过某种通道,选择通道阻断剂来阻止其发挥作用;
4、如果B蛋白通过受体发挥作用,选择其拮抗剂阻止其发挥作用。
lmnsmu wrote:
对你的蛋白认识较少,你查查文献看别人是怎么做的。提出以下想法,仅供参考:
1、可以使用抗体,抗体进入细胞核的可能性小;
2、你提到进核,B蛋白可能是转录因子,可以考虑使用类似于B蛋白的物质作为竞争性抑制剂,可以与相应的靶基因结合而不发挥作用;
3、如果B蛋白进核通过某种通道,选择通道阻断剂来阻止其发挥作用;
4、如果B蛋白通过受体发挥作用,选择其拮抗剂阻止其发挥作用。
谢谢您宝贵的意见哦~我会好好考虑的
谢谢哦~
个人认为 domain negative 是最常规的思路
另外 RNAi后,恢复AB中的一个也是一种方式。
另外 RNAi后,恢复AB中的一个也是一种方式。
有些化学生物学的手段也是针对这种现象的.根据特定的结构来dock一个抑制剂。但是,这种手段很复杂,不易成功。
是否可以通过抑制蛋白A的剪切抑制蛋白B的产生从而抑制蛋白B的活性嘞?(没接触过,问问)
能不能这样子弄,B和A如果是结合在一起的,且你需要抗体进入细胞核,我是否可以猜测两者是一种转录因子复合物,也就是说他们是否结合在一条DNA链上,如果是这样,我认为可以不用阻断B蛋白,而是用chip进行沉淀,对a和b分别进行沉淀,对其结合的特异Dundefined*段进行定量分析,这样子我认为可以找出两个蛋白在功能上的不同点,但前提是这两个蛋白都是转录因子。
另外如果用抗体封闭,貌似对A蛋白的功能也会构成影响。
望战友明确说明研究目的。欢迎拍砖。
另外如果用抗体封闭,貌似对A蛋白的功能也会构成影响。
望战友明确说明研究目的。欢迎拍砖。
一种是找B的专门的抑制剂,查查看有没有,如果没有的话,试着做 domain negative ,看外源表达的A活性的增加引起细胞的什么变化
可以让B的活性结构域所对应的DNA序列定点突变
赞同gyhit的观点
feiji1984 wrote:
能不能这样子弄,B和A如果是结合在一起的,且你需要抗体进入细胞核,我是否可以猜测两者是一种转录因子复合物,也就是说他们是否结合在一条DNA链上,如果是这样,我认为可以不用阻断B蛋白,而是用chip进行沉淀,对a和b分别进行沉淀,对其结合的特异Dundefined*段进行定量分析,这样子我认为可以找出两个蛋白在功能上的不同点,但前提是这两个蛋白都是转录因子。
另外如果用抗体封闭,貌似对A蛋白的功能也会构成影响。
望战友明确说明研究目的。欢迎拍砖。
首先谢谢你的耐心解答哦~
我的研究目的是看B蛋白的低表达或者高表达对细胞的某些性能有什么影响。
我的目的是要保证A蛋白的功能不变(因为A蛋白是细胞膜上的离子通道),通过一些手段,只抑制B蛋白的功能
yuqw2002 wrote:
一种是找B的专门的抑制剂,查查看有没有,如果没有的话,试着做 domain negative ,看外源表达的A活性的增加引起细胞的什么变化
谢谢~
我只是小硕一枚,做domain negative会不会太复杂了?
wst207 wrote:
个人认为 domain negative 是最常规的思路
另外 RNAi后,恢复AB中的一个也是一种方式。
RNAi后如何恢复期中一个蛋白的供能?请赐教~谢谢~
gyhit wrote:
是否可以通过抑制蛋白A的剪切抑制蛋白B的产生从而抑制蛋白B的活性嘞?(没接触过,问问)
抑制了蛋白A的剪切,B就不能产生了,那A还能产生出来么?就算能,A的功能也会受到影响了吧?这是我不希望看到的。。。
谢谢哦
本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴
师兄微信号:shixiongcoming