【求助】阻断细胞内某一特定蛋白的表达
丁香园论坛
4101
各位大侠，小弟请教一个问题哈～
现在想寻求一方法，特异性的阻断细胞内一个蛋白（暂且叫这个蛋白叫B）的作用。
以下是一些背景：
1.蛋白B是从一个大蛋白（暂且叫作蛋白A）中水解下来的
2.B从A中水解下来是自然现象，水解下来以后呢，A和B都有活性的
3.现在想特异性的阻断B的活性，但是要求是不影响A的活性，所以不能用RNAi
4.如果是用抗体的话，请问抗体能进入细胞核吗？
谢谢各位大侠啦～
现在想寻求一方法，特异性的阻断细胞内一个蛋白（暂且叫这个蛋白叫B）的作用。
以下是一些背景：
1.蛋白B是从一个大蛋白（暂且叫作蛋白A）中水解下来的
2.B从A中水解下来是自然现象，水解下来以后呢，A和B都有活性的
3.现在想特异性的阻断B的活性，但是要求是不影响A的活性，所以不能用RNAi
4.如果是用抗体的话，请问抗体能进入细胞核吗？
谢谢各位大侠啦～
哪位大侠能给予我帮助啊～
有人了解 domain negative 么？
有人了解 domain negative 么？
对你的蛋白认识较少，你查查文献看别人是怎么做的。提出以下想法，仅供参考：
1、可以使用抗体，抗体进入细胞核的可能性小；
2、你提到进核，B蛋白可能是转录因子，可以考虑使用类似于B蛋白的物质作为竞争性抑制剂，可以与相应的靶基因结合而不发挥作用；
3、如果B蛋白进核通过某种通道，选择通道阻断剂来阻止其发挥作用；
4、如果B蛋白通过受体发挥作用，选择其拮抗剂阻止其发挥作用。
1、可以使用抗体，抗体进入细胞核的可能性小；
2、你提到进核，B蛋白可能是转录因子，可以考虑使用类似于B蛋白的物质作为竞争性抑制剂，可以与相应的靶基因结合而不发挥作用；
3、如果B蛋白进核通过某种通道，选择通道阻断剂来阻止其发挥作用；
4、如果B蛋白通过受体发挥作用，选择其拮抗剂阻止其发挥作用。
lmnsmu wrote:
对你的蛋白认识较少，你查查文献看别人是怎么做的。提出以下想法，仅供参考：
1、可以使用抗体，抗体进入细胞核的可能性小；
2、你提到进核，B蛋白可能是转录因子，可以考虑使用类似于B蛋白的物质作为竞争性抑制剂，可以与相应的靶基因结合而不发挥作用；
3、如果B蛋白进核通过某种通道，选择通道阻断剂来阻止其发挥作用；
4、如果B蛋白通过受体发挥作用，选择其拮抗剂阻止其发挥作用。
谢谢您宝贵的意见哦～我会好好考虑的
谢谢哦～
个人认为 domain negative 是最常规的思路
另外 RNAi后，恢复AB中的一个也是一种方式。
另外 RNAi后，恢复AB中的一个也是一种方式。
有些化学生物学的手段也是针对这种现象的.根据特定的结构来dock一个抑制剂。但是，这种手段很复杂，不易成功。
是否可以通过抑制蛋白A的剪切抑制蛋白B的产生从而抑制蛋白B的活性嘞？（没接触过，问问）
能不能这样子弄，B和A如果是结合在一起的，且你需要抗体进入细胞核，我是否可以猜测两者是一种转录因子复合物，也就是说他们是否结合在一条DNA链上，如果是这样，我认为可以不用阻断B蛋白，而是用chip进行沉淀，对a和b分别进行沉淀，对其结合的特异Dundefined*段进行定量分析，这样子我认为可以找出两个蛋白在功能上的不同点，但前提是这两个蛋白都是转录因子。
另外如果用抗体封闭，貌似对A蛋白的功能也会构成影响。
望战友明确说明研究目的。欢迎拍砖。
另外如果用抗体封闭，貌似对A蛋白的功能也会构成影响。
望战友明确说明研究目的。欢迎拍砖。
一种是找B的专门的抑制剂，查查看有没有，如果没有的话，试着做 domain negative ，看外源表达的A活性的增加引起细胞的什么变化
可以让B的活性结构域所对应的DNA序列定点突变
赞同gyhit的观点
feiji1984 wrote:
能不能这样子弄，B和A如果是结合在一起的，且你需要抗体进入细胞核，我是否可以猜测两者是一种转录因子复合物，也就是说他们是否结合在一条DNA链上，如果是这样，我认为可以不用阻断B蛋白，而是用chip进行沉淀，对a和b分别进行沉淀，对其结合的特异Dundefined*段进行定量分析，这样子我认为可以找出两个蛋白在功能上的不同点，但前提是这两个蛋白都是转录因子。
另外如果用抗体封闭，貌似对A蛋白的功能也会构成影响。
望战友明确说明研究目的。欢迎拍砖。
首先谢谢你的耐心解答哦~
我的研究目的是看B蛋白的低表达或者高表达对细胞的某些性能有什么影响。
我的目的是要保证A蛋白的功能不变（因为A蛋白是细胞膜上的离子通道），通过一些手段，只抑制B蛋白的功能
yuqw2002 wrote:
一种是找B的专门的抑制剂，查查看有没有，如果没有的话，试着做 domain negative ，看外源表达的A活性的增加引起细胞的什么变化
谢谢~
我只是小硕一枚，做domain negative会不会太复杂了？
wst207 wrote:
个人认为 domain negative 是最常规的思路
另外 RNAi后，恢复AB中的一个也是一种方式。
RNAi后如何恢复期中一个蛋白的供能？请赐教~谢谢~
gyhit wrote:
是否可以通过抑制蛋白A的剪切抑制蛋白B的产生从而抑制蛋白B的活性嘞？（没接触过，问问）
抑制了蛋白A的剪切，B就不能产生了，那A还能产生出来么？就算能，A的功能也会受到影响了吧？这是我不希望看到的。。。
谢谢哦
本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴
师兄微信号：shixiongcoming
