简介
放线菌酮 (cycloheximide) 是一种真核生物蛋白质合成抑制剂，它通过抑制蛋白质合成过程的移位步骤阻止翻译的进行。
原理
放线菌酮阻断法的基本原理是应用放线菌酮阻断细胞合成新蛋白，于一定时间后收集细胞裂解液，提取总蛋白进行 SDS-PAGE 和免疫印迹。根据免疫印迹的半衰期结果的灰度扫描密度值计算出待测蛋白质的半衰期。
用途
放线菌酮阻断法尤为适用于一些难以进行代谢标记的蛋白质半衰期的测定。
材料与仪器
书中未体现
步骤
放线菌酮阻断法的基本过程可分为以下几步：
A. 用 100 mm 培养皿培养贴壁细胞至 80～90％ 融合。
B. 加人放线菌酮至终浓度为 35 ml（或者通过预实验确定放线菌酮抑制蛋白合成又不明显抑制细胞生长的浓度）。
C. 根据不同的时间点（0 min、15 min、30 min、60 min）收集培养细胞，用 300 ul×SDS 样品缓冲液裂解细胞，煮沸 3 min。
D. 4 ℃，[6000 g 离心 5 min，转移上清到新的微量离心管，分装冻于 -80 ℃ 或者直接上样进行 SDS—PAGE。
E. 选择特异性的抗体进行免疫印迹检测，并扫描印迹信号灰度值，拟合线性方程计算蛋白质的半衰期。
注意事项
1. 放线菌酮的使用浓度要控制在合适范围内，过高会导致细胞生长受影响。
来源：丁香实验
