aoe3721 请问 在信号转导过程中 参与信号转导的各种蛋白与通路激活前相比有什么变化啊。其在细胞内的含量会发生改变吗。还是仅仅是发生蛋白结构上的改变。谢谢。selleckchem01 两种情况都可能发生~细胞内含量变化的例子：当Wnt蛋白于细胞表面Frizzled受体家族结合后的一系列反应，包括Dishevelled受体家族蛋白质的激活及最终细胞核内β-catenin水平的变化。 Dishevelled (DSH) 是细胞膜相关W ...

meilixue 如题。poly(rC)中的r代表什么？谢谢。terryxiaolei r代表RNA上的胞嘧啶，即核糖核酸胞嘧啶，不带r的是脱氧核糖核酸胞嘧啶呗……poly(rC)即为多聚胞嘧啶xuezhishui 我觉得poly (rC)应该就是polyribocytidylic acid的缩写，同样的poly (rI)就是polyriboinosinic acid的缩写。其中r代表ribo。不知对否？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的 ...

zhangyinghua8106 研究A药处理对经典Wnt/beta-catenin信号通路的影响，结果发现A处理以后gsk-3 beta 总蛋白量减少，磷酸化gsk-3 beta也减少，而beta-catenin总蛋白增加，磷酸化beta-catenin也增加，这该怎么解释呢？不能说明beta-catenin的增加是由于gsk-3bata的减少吧？我该怎么解释这两个分子之间的关系呢？焦急等待中！望高手指点，谢谢了！！zhangyi ...

吃鱼不吐刺 有哪位前辈制备过AGE-BSA？我制备的AGE-BSA三个月已经出现明显褐色，但是由于不知道如何透析，及怎样测定制备的AGE浓度，实验一直不能进行……哪位战友能够告知下，不胜感激johnchen416 你是如何做的？透析可选用密理博的透析袋，孔径接近但必须小于白蛋白分子量67kd就可以了。用透析袋装AGEs-BSA，封闭严实，放在PBS液中，磁力搅拌器搅拌过夜即可。如果费用可以，可以直接买管子低温超速离心。su ...

hetingcopy 大家好，我现在正在做慢病毒包装，用的是CLONTECK的包装系统，第一次感染293T细胞后，荧光很亮，48H后收集病毒上清，离心后冻于-80度，一天后感染靶细胞，什么都没有？请问大家是怎末做的？谢谢。大鹏鸟 看到荧光并不代表包装成功,它代表的只是你的质粒转进去了。做慢病毒包装时必须要搭配好几个质粒的比例。转染之后要能看到细胞形态的病变。收集上清的时候要注意尽快分装保存。有可能的话最好把细胞也裂解一下， ...

涛声依旧神游天下 你好，我想问下，对于转膜，干转，半干转，湿转，它们适应的分子量是多大的蛋白呢？比如我的目的蛋白是192KD，那么用哪种转膜方式较好呢？什么条件？依据是什么呢？谢谢cfss0925 现在一般都选择湿转的吧。selleckchem01 需要湿转3H以上，这么大的分子半干很难转过去；如果蛋白丰度有比较低的话，基本是检测不出来的~cherrycherry 湿转，90V，120min，依据不同转膜液配方，转膜时间可能有所不同 ...

86964109 请教大家，如果想检测某种miRNA的表达，而miRNA本身有5p和3P两种成熟体，那我设计引物是需要针对两种成熟体都设计么？还是任意一个都可以呢？谢谢！！行云流水19880112 现在我也有同样的困惑，不知您最后是怎么确定的？？？谢谢biohh 自己设计有点难度，很容易就把pre-miRNA检测出来了，建议你购买一些公司里设计好的引物那样比较好操作结果可信些！他们的引物是分3p和5p的。jmj_011 但是3p ...

wudan821 最近一直在研究mTOR信号通路，看了很多文献发现这个信号通路是目前抗肿瘤的热点，很多文献已经明确指出mTOR的下游分子是P70S6K和4EBP1，但是在这 两个下游分子后就很少有人去研究了，我对这个信号通路也只是了解个皮毛，想求助战友谁知道在这两个下游分子之后还能研究什么？这两个下游分子是这个信号通路的终结吗？我最近看了很多信号图谱，发现JAk-PI3K-AKT-mTOR-STAT3这一信号通路，这 ...

dangyonghui2 大侠们，我现在用的是promega公司的cAMP测定试剂盒，按照说明书上面要求做的标准曲线，可是我做了几次出来和说明书上面都不一样，是怎么回事？求解！！！现在有测cAMP的同志们一起讨论下，我的Q:1186130200bianbenjamin 我们用的是PE的盒子LANCETM cAMP 384Kit（PE公司）1.检测原理：该试剂盒是一种时间分辨的荧光共振能量转移免疫分析，该反应是一个竞争免疫反应，即 ...

mahaizhi 各位前辈，请教一下在国内能不能购买到ATCC的原装细胞，有没有哪家公司或者什么机构是ATCC在国内的指定代理。如果有的话，请不吝赐教联系方式。谢谢。ddh382 我也想知道veimojie ATCC 在中国的总代理是北京中原公司 比较放心 都是ATCC原装干冰包装发给客户 有兴趣可以去公司主页看看 网址http://www.sinozhongyuan.com/index.aspxiaojianmao 同中原，我们上回说要定一个， ...

z1206 小女子想请教一下园子里的各位战友们，除了上海生工还有哪家生物公司可以帮忙设计PCR引物啊？或者园子里哪位大侠可以帮忙呢？我一对引物，自己设计后没结果，请上海生工帮忙设计，他们也说太难，设计不出来，所以形势很严峻啊，拜托各位了！~~~~~~~zjubell 尽量自己设计引物，再不行，让师兄姐帮忙。失败的过程也是自己学习的过程。连引物都不会设计的硕士毕业生，呵呵，不说了。selleckchemcials 设计引物时首先可以查 ...

dery 谁有pJim19 vector map and it's sequence呢，贡献一下吧！！！！freecell 耶鲁大学的邓教授实验室有此质粒。可以写信求助：Xing Wang Dengxingwang.deng@yale.edu版主dachong99留言:欢迎前辈常来坐坐...dery 请问你有这方面的信息吗，网上怎么找不到？seank 扣扣1843439339本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以 ...

anlise 刚做的western，跑分离胶时发现mark的条带被拖长了，原来的线性条带变成了长方形。考虑哪些方面的原因呢？selleckchemcials 1. 可能是电流太强了， 可以考虑把电压调低一点~2. 分离胶浓度有点低，可以考虑把换成高浓度的胶~做实验的时候，为了得到漂亮的图，一定不要介意多花时间~我有的时候为了让条带好看，170KD的蛋白都用12%的胶，跑上3小时呢~当然也可能是marker质量不好，还是果断换掉比较好~ ...

mirror122 大家好，我从中山大学发表的论文中看到，他们没有提取RNA，而是直接用特异的引物对其中的microRNA进行反转录，然后再做定量PCR，不知道大家有人用过这种方法吗？可行吗？haidaweishengwu 我也在座microRNA的提取，有机会交流一下mirror122 好呀，不知道你是怎么提取RNA的？huahuaxxh66 现在检测血浆microRNA都很昂贵，请问国内目前有没有相对合适的方法吗？或者哪 ...

mirror122 请问大家谁做过从血浆中提取总RNA 包括microRNA，我要对里面的microRNA进行定量检测。请教一下实验方法，哪个公司的试剂盒比较好。谢谢！906003500 takara 或者 英潍 都挺不错的。2004112841 我们用的是MRI的TRI REAGENT BD，货号是TB-126，做的还可以，也有文献用这个。clothilde 2004112841 wrote:我们用的是MRI的TRI REAGENT BD，货号是TB-126， ...

qulinyd 最近在做hsv tk,所用前药为粉末状GCV（购自sigma），但不知道怎么溶解合适，还请各位帮帮忙哦freecell 你从sigma买来的东西，应该有个datasheet吧：Preparation InstructionsSoluble at 10 mg/ml in 0.1 N HCl.Storage/StabilityStore desiccated at 2-8 °C. Under these conditions the product is stable for 3 years.说明 ...

66xiaogai 求教：我要构建一个逆转录病毒载体，不知道在插入外源基因（shRNA）时需不需要考虑像一般的载体表达时考虑基因错配的问题，如果加入的外源基因上带有启动子，那逆转录病毒载体上的启动子要切掉么？谢谢。破茧的蝶 楼主问题解决了吗？现在遇到同样的困惑~~shylook 最好用shRNA的vector吧比如PLKO等等不是的话 你要看载体自身带不带ATG 带的话 需要考虑不带的话 自己加上去即可本文由丁香园论坛提供，想了解更多有 ...

SYendocrine 想请问各位大虾，sonic hedgehog通路的特异性激活剂是什么？（附加：另外有没有哪位知道该通路在肾小球系膜细胞中是否表达，如果想测是否表达通过RT-PCR测SHH，通过Elisa法测shh蛋白就行了么？）请各位大虾不吝赐教！！大鹏鸟 好像只有SHH能激活，没看到有文献说有其他激活剂的。想测表达与否还是通过传统的方法,RT-PCR ,WESTERN，ELISA等SYendocrine 大鹏鸟 wrote:好 ...

bigyo 急求解决！有谁给大鼠注射过SB203580，怎么用DMSO溶解后，再用PBS稀释又析出沉淀呢？yxj360367100 你好。除了用DMSO溶解，SB203580还能用其他的溶剂溶解吗？zhaichao_1 我的也是这个样子，于是我就将药物这样悬浮打入，结果老鼠死了xiye616 请问你的析出问题解决了么 我们遇到同样问题 比较着急 感谢zcbpaul 我也是同样问题啊，怎么解决呢bigyo 毕业了，解决不了，换公司吧本文由丁香园论 ...

hellosdd 我最近正在做单负链RNA病毒（狂犬病毒）的rna提取，逆转录及目的基因的扩增，可是结果是 目的基因没有出现，引物是在比对后在保守处设计的，但是产物除了引物条带和一非特异条带（30个循环，不是很亮）外，再无其它条带，尝试提高退火温度 但是结果仍不好，合成cDNA的时候，使用的是以ATG（应该是上游引物吧）开头的引物。我不知道哪里出错了，希望能得到大家的建议。目的条带大概在1500bp附近，P出来的条带在500~7 ...