疏水相互作用层析

疏水相互作用层析原理

疏水作用层析原理是根据生物分子的疏水性差异进行分离。当生物分子通过疏水作用层析介质的时候，生物分子的疏水基团与层析介质的疏水配基相互作用，之后通过降低缓冲液的疏水性来进行洗脱，从而使生物分子通过疏水作用产生分离，纯化获得目标样品。

 

特色

属于其他层析技术的互补技术

• 高选择性，特别适用于疏水性高的目的物分离纯化
• 由于需要高盐条件，易使蛋白沉淀、变性，因此其应用范围受限
• 属于吸附性层析类型，具有浓缩作用
• 操作环境的温度对层析过程及结果的影响较大
• 适于疏水性强的蛋白、耐高盐蛋白的分离

 

基本步骤

疏水作用层析作为一种吸附性层析，主要步骤包括平衡、上样、清洗、洗脱和再生步骤。疏水作用层析一般在高盐环境中上样，经过上样和清洗之后，通过降低洗脱液中的盐浓度逐渐对不同的分子进行洗脱。其流程可参考下图（图13）：

图13 疏水作用层析流程图

 

填料选择

疏水填料和离子交换填料类似，都是由基架和疏水配基交联而成，常见的疏水填料配基有 Phenyl、Butyl、Octyl 等，常见疏水填料强弱如图所示：

图14 常见疏水填料强弱图

 

• 疏水性强弱，在实验初期，一般先使用疏水性最强的疏水填料（如 Phenyl 填料）进行条件摸索，确保对于目的分子来说，疏水层析是适用的，后期为了改善分离效果可以选择其他的疏水填料。
• 按照不同的基架或粒径大小进行填料的选择，粒径越小，分辨率越高，反之则分辨率相对较低