疏水作用层析法

疏水相互作用介质

苯基琼脂糖-O-CH₂-CHOH-CH₂-O-C₆H₅

辛基琼脂糖-O-CH₂-CHOH-CH₂-O-（CH₂）₇-CH₃

溶液盐浓度增加时疏水作用变得更强。因此，大多数疏水层析程序都是高盐时上样，降低盐浓度时洗脱。所以在硫酸铵沉淀或离子交换层析后可以方便地直接进行疏水层析纯化。温和的洗脱条件及高蛋白质结合容置（10～100 mg/ml）使疏水层析在蛋白质纯化中成为很有价值的方法，也是更换缓冲液的方法之一。

下述方案设定样品是在 75％ 硫酸铵沉淀后溶在 50％ 硫酸铵溶液的情况。

1. 装填 5 ml 苯基琼脂糖 CL-4B 进入柱内；

2. 10 倍柱床体积层析缓冲液（20 mmol/L，pH 7.0 磷酸钠盐，50％ 硫酸铵）洗柱；

3. 调整样品液符合要求，即在 pH 7.0 磷酸钠缓冲液中含 50％ 硫酸铵。上样总蛋白量 200～500 mg；

4. 3 倍柱床体积层析缓冲液洗柱或洗至 A₂₈₀ 值回到基线；

5. 用分步梯度法洗脱。每步依次分别采用两倍体积各含 40％、30％、20％、10％ 或 0％ 硫酸铵的 pH 7.0 磷酸钠缓冲液洗脱；

6. 再依次用 5 倍体积水、5 倍体积 1 mol/L NaCl 和 5 倍体积水洗柱，使其获得再生。