疏水层析中酯类与疏水性强蛋白的分离

问：小试的时候用预装柱摸索好的纯化方法：

缓冲液（1）：上样平衡缓冲液，PBS+0.8M 硫酸铵

缓冲液（2）：清洗杂蛋白缓冲液，PBS+0.3M 硫酸铵

缓冲液（3）：Tris-HCl pH9.0 0.1M

phenyl FF（high sub）疏水柱，收率与蛋白质性质都可以达到要求。在放大时候，就发现用Tris-HCl pH9.0 0.1M洗脱不下来我的目的蛋白，然后我改成用水洗脱，可以洗脱下我的蛋白，但是由于发酵产品产量的增加，现在洗脱峰中出现了酯类，就是蛋白与酯类在同一峰中出现.

虽然可以在不同的收集管中（目的蛋白现出来，然后紧接着就是有浊度的酯类），但是我的目的蛋白还是有微微的浊度，40度加速过夜，就能看见很明显的浊度，我用搞浓度的TritonX-100可以将其溶解.

但是我的产品不能有很高浓度的TritonX-100，原来我设想用低浓度的TritonX-100作为洗脱液中的添加剂，想使目的蛋白和酯类分开，但是忘记了TritonX-100在280有吸收，所以不可取。

现在我想使酯类与疏水性强蛋白分开，还是要使用我现在填料，大家有什么好的建议吗？

答：浑浊部分检测肯定是脂类吗？我觉得在水中蛋白溶解不好，特别是高浓度的容易出现乳浊状的，如果确实是脂类，可以把条件改为100-20mM硫酸铵，这样应该有个浓度能把蛋白和脂类分开，如果你小试没问题的话。