骨髓间充质干细胞的原代培养方法

实验大纲

骨髓间充质干细胞是多能干细胞。因此，作为再生医学的细胞来源，它是活性研究和临床应用的目标。当骨髓液或骨髓细胞接种在培养皿上时，间充质干细胞会作为粘附细胞增殖。因此，间充质干细胞可以从漂浮的血细胞中分离出来。在此，我们报告了使用 Evident Prov CM20 培养监测系统对间充质干细胞原代培养的远程监测结果。

 

试验程序

使用补充了 10% 胎牛血清（FBS）和 1% 青霉素链霉素的 Iscove 改良 Dulbecco 培养基（IMDM），将市售人骨髓细胞以 950,000 个细胞/0.5 ml/孔的密度接种在 24 孔板（Sumitomo Bakelite，目录号 MS-80240）上。使用 CM20 系统每小时对细胞进行一次自动聚焦成像。由于在培养的第 4 天观察到粘附细胞的增殖，因此在更换培养基后对其进行长达 6 天的监测。

 

结果

图 1.骨髓间充质干细胞的原代培养。箭头表示骨髓来源的间充质干细胞。

 

大多数细胞是血细胞，接种后未立即观察到间充质干细胞。然而，在接种后第 4 天，出现了具有纺锤体形态的间充质干细胞。随后，更换培养基以去除血细胞。接种后第 6 天，发现间充质干细胞增殖为大量细胞。

 

使用培养监测系统评估的好处

骨髓间充质干细胞的原代培养应尽可能温和进行，直到出现粘附细胞。应尽可能避免在显微镜观察或更换培养基过程中发生晃动。在这里，我们展示了用 CM20 系统远程监控培养中的细胞的过程。通过使用 CM20 系统，我们缩短了操作时间，并可以在适当的时间继续进行其余的试验。