细胞的碘化丙啶染色用于FACS分析
互联网
7278
FACS用于研究细胞组分DNA，碘化丙啶（PI）嵌入核酸双链中并可以发荧光。它不能进入活细胞，但是可以进入正在或者已经死亡的细胞。因此PI可以用于免疫荧光染色来鉴定死细胞。DNA染色可以用于研究细胞周期。相对的DNA含量可以坚持G1，G2和S期细胞的比例。在DNA染色中凋亡的细胞有特有的颜色。
一、材料和试剂
1. TritonX-100（SigmaCatalogNo.T9284）
2. 碘化丙啶（SigmaCatalogNo.P-4170）
3. 乙醇
4. RNaseA（SigmaCatalogNo.R4642）
二、仪器
1. 离心机
2. 流式细胞仪器（FACS）
三、步骤
1. 胰蛋白酶处理和收集细胞，将细胞固定到0.5 ml 70%EtOH（预冷到-20°C过夜）。
2. 存储固定的细胞到冰上至少一个小时最多到几天。
3. 离心细胞2 min，4 000 rpm。
4. 在含有0.25%TritonX-100的0.5 ml PBS溶液中重悬细胞，并且在冰上孵育15 min。
5. 离心细胞2 min，4 000 rpm。
6. 弃掉上清液，并在含有10 μg/ml RNaseA和20 μg/ml PI储存液的0.5 ml PBS重悬细胞，转移到FACS管子中在黑暗中室温孵育30分钟。
7. 准备做FACS。
