FACS实验：求大神帮忙找下原因。

小小白在哦

2023-04-24

细胞：jimt1细胞（含A高表达，B高表达）抗体：A,B,以及含A,B的双抗C。目前做jimt1与A,B,C的结合，发现在FITC-count图中，A出现双峰，其中高峰占比为65%，B与C无此现象。为分析出现双峰原因以及去掉双峰，初步怀疑是JIMT1细胞中有部分低表达的细胞，将JIMT1做了亚克隆后，将这些亚克隆细胞（共8个，养了一个月）与A再次做了结合检测，未出现双峰，同时用JIMT1细胞与A结合作为对照，结果是亚克隆细胞与A结合的峰值都小于JIMT1与A结合的峰值，但按照65%的概率来讲应该比对照组有高有低，请教一下是什么原因呢，是我进行的方向错了吗？（排除A含量不足的情况，后来做了一次JIMT1细胞数量减半A不变的，结果还是高峰占比65%）

2 个回答

loveliufudan

2023-04-25

有帮助

这种双峰的现象可能有多种原因，但根据你的实验结果，可能性比较大的是在JIMT1细胞中存在不同表达水平的细胞。你的亚克隆实验似乎支持了这个假设，即使用亚克隆细胞的结合峰值都小于JIMT1与A结合的峰值，但这并不排除存在表达水平不同的细胞群的可能。可以考虑将细胞分选或者单细胞测序，以进一步探究这种双峰现象的原因。另外，如果实验设计和处理操作存在问题也有可能导致这种双峰现象，需要仔细排查。

毛利小五郎的徒弟

2023-04-25

有帮助

在二者共存的时候（J细胞和亚群)出现双峰是合理的，分别测由于体系中只有一种细胞而不出现双峰，你把J细胞提纯后再做就可以避免双峰