抗CD3 McAb诱导的细胞毒性T细胞功能的检测
互联网
1705
抗CD3 McAb诱导的细胞毒性T细胞功能的检测
【试剂及材料】
（1） 靶细胞：EB病毒转化的B淋巴母细胞。
（2） 含5％NCS的RPMI-1640完全培养液
（3） 100μCi/ml 51 Cr
（4） 抗CD3 McAb（4μg/ml）
（5） 2％Triton X-100。
【操作方法】
（1） 靶细胞的标记:将5×105 /L 1.9ml EB病毒转化的B细胞和100μCi51 Cr/ml 100μl加入24孔培养板孔中，置37℃，5％CO2 温箱孵育18～24h。收集放射性标记的靶细胞用完全培养液洗一次，室温1500r/min离心5min。用台盼蓝染色计数细胞活性后，用完全培养液调整细胞浓度至1×105 /ml；
（2） 效应细胞的制备:取无菌肝素抗凝血，采用密度梯度离心法分离PBMC，用完全培养液调整细胞浓度为1×106 /ml；
（3） 在96孔培养板中分别加入效应细胞100μl，同位素标记的靶细胞50μl和抗CD3 McAb 50μl。设仅含靶细胞（无效应细胞和抗CD3 McAb）的自然释放对照孔，标记靶细胞和150μl 2％ Triton X-100作为最大释放对照孔，含靶细胞和效应细胞的自然杀伤细胞活性孔。每份均为3复孔；
（4） 500～800r/min离心2min，置37℃，5％CO2 温箱中温育4h；
（5） 1400r/min离心5min，用加样器从各孔收集100μl培养上清或用多孔收集器吸出全部上清，用γ计数器测量每份上清的cpm值；
