做体外受精这么难吗?最容易被忽略的3个实验影响因素
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小鼠体外受精过程中被最容易被忽略的3个影响因素
体外受精(In Vitro Fertilization)是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术,英文简称为IVF。小吉今天就和大家分享下在小鼠体外受精过程中最容易被忽略的3个实验影响因素。
因素一:你对实验的品系了解吗?
体外受精目前基本适用于各个背景小鼠,但是其受精率随着品系的不同,会有所差异,甚至是比较大的差异,如NOD背景小鼠,其在超排后卵子异形率高,从而导致受精率整体较低,很多实验工作者发现受精率低,胚胎“丑”,往往寻找实验操作、实验试剂等原因,从而忽略了品系本身的特性,这里特别强调实验前基本的知识储备还是非常有必要的。
因素二:你的矿物油做过预实验吗?
在了解品系特性的基础上,如果还不能得到一个满意的结果,大多数人在查找试剂方面原因时,第一反应可能是体外受精液、获能液,常常忽略了用于覆盖培养滴的矿物油,其对胚胎发育也是非常重要的一环,还有影响生仔率。目前,药康每批次的矿物油都是经过严格预实验把关,即IVF囊胚发育率可达80%以上,才判定为新的矿物油可用,小吉建议大家对于矿物油也要有相应质控的过程。
因素三:你的培养箱校准过了吗?
该点也是最容易被实验人员忽略的一点,现在的培养箱目前都会显示温度和二氧化碳浓度,5%的二氧化碳浓度可以平衡试剂,使其维持PH在7.2-7.4之间,但实际显示在培养箱上的二氧化碳浓度其实是会发生偏移的,也就是说你看到的并不是真实的,且该种偏移会导致受精率的高低起伏,往往实验工作者因为其中有不错的数据,就会自动排除掉培养箱的因素,从而找错方向,费时费力。因此,定期使用仪器校准培养箱非常有必要。