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小牛肺动脉平滑肌细胞的首次传代

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1、传代前24h先将组织块去除:等到细胞覆盖瓶底80%以上后进行组织块去除操作。可用弯头玻璃吸管将组织块轻轻挑起吸出,确保无组织块留下,以防坏死污染。

2、胰酶消化:倒掉旧培养液,用D-HANKs液清洗两边,加入已预热(37度)10min的0.25%胰酶消化液2ml,2-3min后镜下观察,发现胞质收缩,细胞间隙增大,立即用含胎牛血清的培养液终止消化。

3、弯头吸管吹打细胞:吹打一定时间后到镜下观察,在没吹打起细胞区域继续吹打,动作要柔和。

4、离心:2000转5min。倒掉上清液,加入培养液,吹打成散在细胞。

5、计数和接种。

6、贴壁后更换培养液:由于消化不当或其他原因,接种后的细胞可能会有死细胞及其他杂质影响细胞生长,所以贴壁后(一般6h)要更换培养液。

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