3T3成纤维细胞传代
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(1)准备大量的3T3细胞,每个安瓿瓶装1-1000000个细胞,然后冻存。使用的细胞不超过20代。
(2)将3T3细胞加入175cm2的培养瓶中,用含有10%小牛血清DMEM培养。案每平方厘米15000个细胞接种。2天后换液,每4-5天传代。
(3)通过60Gy X射线或Co饲养细胞灭活。被照射的3T3细胞在4度条件下可存放3-4天。
(4)在无照射源的条件下,用丝裂菌素C灭活饲养细胞。
(5)在37度条件下,用400微克每毫升的丝裂菌素C处理单层3T3细胞1h。
(6)用胰蛋白酶消化丝裂菌素C处理过的细胞活,混悬细胞,用含有血清的培养液洗细胞2次。然后,用完全培养液混悬细胞调整细胞密度。