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western blotting的一些细节-2

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1248
上样缓冲液的问题:
 
上样缓冲液配多少浓度双较合适,这个问题是很重要的。因为这里涉及到上样量的问题。
如果上样孔只能上样30ul。而样本中蛋白较少,要上样25ul才有可能做出蛋白条带。这个时候就要用到高倍上样缓冲液。以下是6倍缓冲液的配方:
 
undefinedSDS凝胶上样缓冲液:
 
300mM/L tris-HCl(pH6.8)
600mM/L DTT
12%SDS
0.6%溴酚蓝
60% 甘油
 
此外,提高上样量还有一个办法。就是在上样缓冲液和样品混合煮的时候开盖,这样可以使一部分水份蒸发,从而提高上样量。

 

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