石蜡切片与冰冻切片

一、组织和细胞标本类型：

（一） 组织标本类：

1、 石蜡切片：组织形态保存好

2、 冰冻切片：抗原性保存好

（二）细胞标本类：

1、组织印片 2、细胞培养片（细胞爬片） 3、细胞涂片

二、组织取材

1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后固定。

2、组织取材注意事项：

（1）标本新鲜：组织要求离体后30min~2h内浸入固定液，尤其是开展分子生物学工作。动物组织取材要求心脏还在跳动时取材。

（2）注意防止人为因素的影响 刀和剪要快，避免挤压。

（3）组织块的大小 厚为0.1~0.3cm，大小可根据需要而定。

三、活细胞标本的制备法

（1）细胞大量培养后，经消化将细胞制成悬液（106）涂在涂有切片粘合剂的载玻片上，凉干后固定。

（2）将细胞直接培养在盖玻片上。

（3）将细胞直接培养在6孔或9孔板上，经固定后可行IHC。

四、石蜡切片的制备

1、由于石蜡不溶于水和醇类试剂，只溶解在二甲苯类试剂中。因而，组织经固定和水洗后含大量水分，需用乙醇类试剂进行脱水，水脱完后，组织内含有大量的乙醇，还必须用能溶解乙醇的二甲苯来置换，最后经浸蜡，组织细胞内被大量石蜡支称，才使组织能用于石蜡切片。

2、小动物组织脱水、透明和浸蜡时间

75%乙醇30min，85%乙醇30min，95%乙醇Ⅰ1h，Ⅱ1h，Ⅲ过夜或2h；无水乙醇Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各30min；二甲苯Ⅰ15min， Ⅱ10min，Ⅲ10min；石蜡Ⅰ30min，石蜡Ⅱ30min，石蜡Ⅲ1~2h。

五、冰冻切片的保存和使用

1、冰冻切片固定后-80℃保存备用

2 、冰冻切片从-80℃取出，凉干或电吹风吹干后可直接进行免疫组化标记。