石蜡切片

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一 材料的选择与分割
　　选取新鲜、无病虫害并具代表性的材料
　　先作徒手切片或剥离检查，决定适宜的材料，立即固定。
　　注意按季节和植物 生长发育不同阶段取材。

　　材料大小要适当；
　　　　例根：直径5mm以内----切取5-10mm小段
　　　　例叶：切成2-5mm
　　　　例茎：横切或纵切
　　　　例花：花药:横纵；子房：横纵

二 杀死、固定、保存
　　杀死：在制片过程中，将制片的材料迅速杀死，使组织块尽量保持原生活状态。这种处理叫杀生（死）。用一种或多种化学药品。
　　固定：在杀生处理过程中，将材料按原来的形态保存下来，并为后续制片保持固有形态，达到固定的要求。杀生、固定关系密切，通常二者兼有作用。
　　保存：组织块茎杀伤固定后，能较长时间保存下来，仍能制片。

常用固定液：
　　FAA固定液（福尔马林-冰醋酸-酒精），万能固定液或标准保存液。
　　适用范围：根、茎、叶、花药、子房的组织切片均可
　　固定时间：一般24h， 并可在此液中长期保存。温度宜低（10度左右）
　　之后不必水洗，直接70%（嫩材料50%）酒精洗---进行脱水。
　　配法：福尔马林（38%甲醛）----5ml
　　　　　冰醋酸-------------------------5ml
　　　　　70%酒精-----------------------90ml （幼嫩材料50% 酒精防材料收缩）
　　用于胚胎材料改为：50% 酒精----89ml
　　　　　　　　　　　甲醛------------5ml
　　　　　　　　　　　冰醋酸---------6ml
　　　　可加入5ml甘油（丙三醇）放固定液蒸发和材料变硬。

Canoys Fluid（卡诺氏液）
　　适用范围：常用于细胞学如根尖，花药的压片，及子房石蜡切片
　　固定时间：不同。根尖、花药15min-半小时，花药1h，其他材料不超过24小时（12-24h）否则材料受到破坏。固定后用同浓度酒精洗涤。
　　保存液：70% 酒精（95%，85% 酒精浸洗约20 分---70%酒精中保存）
　　卡诺液配制：纯酒精（或95%酒精）：冰醋酸=3：1

三 脱水
　　制作石蜡切片，要把材料包埋在石蜡中，所以浸蜡前必须把材料中水分出去。有水分石蜡无法渗入到细胞中。
　　脱水：就是用一种药剂，把材料中水分全部代替干净。
其作用：
　　1 材料变硬，形状更稳定。
　　2 除尽水分，使包埋剂和封固剂渗透于组织中，包埋剂和封固剂不能与水混合，必须
把水除尽。

常用脱水剂：
　　酒精（不是最理想的，易引起组织收缩，使材料变硬。脱水后还要用其他有机溶剂除尽酒精。但应用久，价格低廉。）
注意：
　　1 脱水从低浓度开始逐渐替换高浓度酒精。否则发生细胞收缩。
　　2 从同浓度（保存液中）酒精开始。例FAA 从70% （50%）酒精开始。
　　3 30%---50%---70%----85%----95%（加少许番红，便于包埋中识别）---100%--100%。加盖，各级酒精停留时间因材料而定，材料2mm，各2-4h。

四 透明
　　脱水后要经过常用的有机溶剂（氯仿，二甲苯等）进行透明，便于石蜡及封固胶进入和溶合。当材料为透明剂所占，在显微镜下观察成透明状态。
　　常用的透明剂：二甲苯、氯仿、冬青油等。
　　二甲苯（xylol）是目前应用最广的透明剂，作用迅速，但易使材料变脆。盖盖！！
　　注意：使用时材料必脱尽水分，否则发生乳状混浊。
　　　　　避免材料收缩----1/2 xyl + 1/2 alc （1h）-----xyl （1h）-----xyl （0.5 h）

五 浸蜡
　　以石蜡透入细胞组织内的全过程称为---浸蜡。其目的在于，除去材料中的二甲苯而代之以石蜡。
方法：
　　1 透明材料放小烧杯中，注新二甲苯漫过材料
　　2 加溶化的石蜡，由烧杯一侧慢慢倒入，与二甲苯等量
　　3 小烧杯放入蜡箱内（60℃）30-60min
　　4 换纯蜡，每次1-2h

六 包埋
　　选蜡：软材料---------------------------54-56℃熔点，（黄承芬p73）
　　　　　5um以下厚度或夏季切片---58-60℃石蜡
　　叠纸盒
　　倒干净溶解的石蜡,半盒。
　　把材料放入，排列好，切面朝下（注意横切纵切）
　　赶气泡，放冷水中冷却。

七．切片

八．粘片和展片。

九．脱蜡：二甲苯

十．染色：苏木精、番红、固绿、碱性品红
　　单染 ：只用一种染料
　　双重染色：两种染料 番红--固绿； 苏木精---曙红
　　多重染色：多种染料 番红—固绿—桔红G；酸性品红—苯胺蓝—桔红G等