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质粒的酵母直接转化

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2849

[试剂]

PLATE 溶液:

40 %聚乙二醇( PEG ,分子量 3350 ; Sigma P 3640 )

0.1mol/L 醋酸锂

10 mmol/L Tris-HCl ( pH7.5 )

1 mmol/L EDTA

[试验方法]

1. 用牙签从平板中挑取单菌落(直径 2 ~ 3mm ),转移到 1.5ml 的无菌离心管中。

2. 将 10 μ l 载体 DNA ( 100 μ g )与 10 μ l 转化质粒 DNA 混合,振荡均匀。(若转化 DNA 是用未经 RNA 酶处理的“ mini - prep DNA ”方法制得,则不需加载体 DNA )。

3. 加 0.5ml PLATE 溶液,振荡。

4. 置于实验台上,室温培养 4 天。

5. 置 42 ℃下热激 15 分钟。

6. 以 8000 ~ 10000r/min 离心 10 秒沉淀细胞 ,小心弃去上清液,将细胞 轻轻悬浮到 200 μ l 无菌蒸馏水,使细胞 悬浮均匀,再直接将混合液涂选择平板。

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