质粒的酵母直接转化
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摘要： 下文为大家介绍质粒的酵母直接转化的方法.
试验试剂:
PLATE溶液: iZN ;40％
聚乙二醇
(PEG,分子量3350;Sigma P 3640);0.1mol/L 醋酸锂 g;10 mmol/L Tris-HCl (pH7.5);1 mmol/L EDTA;
实验步骤:
1、用牙签从平板中挑取单菌落(直径2～3mm),转移到1.5ml的无菌 离心管 中.
2、将10μl 载体 DNA (100μg)与10μl转化质粒DNA混合,振荡均匀.(若转化DNA是用未经 RNA酶 处理的“mini－prep DNA”方法制得,则不需加载体DNA).
3、加0.5ml PLATE溶液,振荡.
4、置于实验台上,室温培养4天.
5、置42℃下热激15分钟.
6、以8000～10000r/min离心10秒沉淀细胞,小心弃去上清液,将细胞轻轻悬浮到200μl无菌蒸馏水,使细胞悬浮均匀,再直接将混合液涂选择平板.
