抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)活性

一、原理

AsA-POD催化AsA与H2O2反应，使AsA氧化成单脱氢抗坏血酸（MDAsA）。随着AsA被氧化，溶液中290nm波长下的消光值（A290）下降，根据单位时间内A290减少值，计算AsA-POD活性。AsA氧化量按消光系数2.8（mmol/L）/cm计算，酶活性可用每克鲜重每小时氧化AsA的微摩尔数μMol/g·H表示。

二、仪器

离心机；紫外分光光度计；研钵；试管。

三、试剂

50mmol/L K2PO4－KH2PO4缓冲液（PH7.0，内含0.1mmol/L EDTA-Na2）

0.3mmol/L AsA；

20μmol/L AsA；

0.06mmol/L H2O2。

四、方法

1. 酶液制备取1.0g植物叶片剪碎，按1∶3（W/V）加入预冷的50mmol/L K2HPO4－KH2PO4缓冲液进行研磨提取，用两层纱布过滤，滤液在4000r/Min下离心10min，上清液作酶粗提液供测定。

2.酶活性测定3ml反应混合液中含50mmol/L K2HPO4－KH2PO4缓冲液（PH7.0），0.1mmol/L EDTA-Na2，0.3mmol/L AsA，0.06mmol/L H2O2和0.1ml酶液。加入H2O2后立即在20℃下测定10~30s内的A290变化，计算单位时间内AsA减少量及酶活性。