【求助】土壤微生物总DNA的提取及细菌16S rDNA的PCR扩增出问题了,寻求大家的帮助!
丁香园论坛
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我用MO Bio的soil DNA Isolation Kit提取土壤总DNA,提取的DNA直接跑胶,看不见任何条带,采用细菌16S rDNA通用引物(27F和1492R)进行PCR扩增,也没有结果,有一次我将试剂盒提取的DNA50倍稀释后,进行细菌16S rDNA的PCR扩增,扩增出了目的条带,我所用的酶为Takara的LA Taq,用普通的Taq酶扩增不出来,但隔了一周后再去重复,什么条件都一样,却再也扩不出来了,我重新提取了新的DNA进行PCR,依然没有结果,不知道是什么原因,请大家帮忙分析一下,希望有做过土壤微生物多样性的高手提供点提取土壤DNA以及扩增细菌16S rDNA的实验方法,我将不胜感激!我现在非常着急!希望能尽快得到大家的帮助!
提到的DNA里面存在污染,你的稀释倍数不够,我是用手提的DNA,稀释100倍进行16s的 PCR。
谢谢!那我稀释倍数加大点再试试。
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