兔单抗开发及案例分享

2019 年 10 月 8 日，美国食品药品监督管理局（FDA）批准了诺华的 Beovu®（brolucizumab）注射剂用于治疗 wet-AMD，这是 FDA 批准的首个兔源单抗药物。Beovu（brolucizumab）的本质是一种人源化单链抗体片段（scFv），是目前达到开发阶段的临床上最先进的人源化单链抗体片段。单链抗体片段体积小、组织渗透性强、可从全身循环里快速清除及其药物释放特性，其在药物开发中备受追捧。

单克隆抗体技术起源于 Kohler 等创建的体外鼠源杂交瘤技术。经几十年发展，鼠单抗已从单纯的生物实验室科研及临床诊断发展到治疗性抗体药物。目前的抗体药物大多来源于小鼠或噬菌体展示库。2019 年 3 月，首个骆驼源纳米抗体 Cablivi 获得 FDA 批准上市。2019 年 10 月，迎来首个兔单抗药物 Beovu，是抗体药物发展历程中的一个里程碑。

临床使用的大多数治疗用抗体均需进行体外亲和力成熟，以提高抗体的亲和力。这一过程耗时长（8-12 个月），最终亲和力在 10-9mol/L。而兔单抗不需经体外亲和力成熟，就能达到 10-11 至 10-13mol/L。另外，兔与人的抗体同源性更高，约 60%～76%，而小鼠与人的抗体同源性为 57%～72%，兔单抗的人源化比鼠单抗更容易实现。

兔单抗药物的上市，揭开了抗体药物研发的新篇章，发展潜力不可限量。兔单克隆抗体具有高亲和力、高特异性、高灵敏度，可识别更多新型表位，杂交瘤克隆数更多，容易人源化等优势。因此，用兔单克隆抗体开发治疗用抗体药物的前景更广阔。

普健生物可提供兔源天然scFv库供各种抗原进行淘选，抗原类型涵盖蛋白，多肽，小分子和细胞表面抗原。普健生物兔源天然scFv库优势：

1. 分为 κ 和 λ 两种轻链亚型的单链抗体库，与大多数商业化混合库不同，即可用于筛选 κ 型抗体，也可用于筛选 λ 型的高亲和力抗体。

2. 序列正确性高，来源丰富，库容可达十亿级别。

3. 两步法建库，先连入轻链再连入重链，保证了库的高质量和多样性。

4. 带有 His 标签，可直接用 phagemid 表达抗体，His 标签纯化。

普健生物也可提供兔源 scFv 抗体库文库构建及淘选技术服务。

案例展示

1.动物免疫：3 只兔子，经四轮免疫后抗血清效价如下图：

3 只兔子免疫血清效价结果

2.兔免疫库的构建：库容达 1.01×10⁹ pfu，插入正确率>95%，序列正确率>85%。

克隆PCR验证结果

3.兔免疫库的淘选和筛选：文库经过 4 轮淘选富集和 96 个单克隆筛选，阳性克隆比例超过 40%，阳性克隆测序获得了 6 条不同的阳性兔单抗序列。

4.抗体重组表达及检测验证：6 条阳性兔单抗采用普健生物哺乳系统重组表达，ELISA 检测结果显示重组抗体能与蛋白抗原良好结合。