互联网
1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。
2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。
3、足够多的载体和插入片段是最重要的 。
我认为也不一定，要看片段具体情况而言，有时载体和片段浓度过高，容易产生线性化产物，不利于环化的。
4、平端的连接对于离子浓度很敏感
回收的时候多洗洗
我做了几次都很顺的
加PEG和扩大酶量
22度2小时后4C过夜
5、尽可能缩小连接反应的体积，最好不超过10微升，在5、6微升左右最佳。
6、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14度好
相关产品推荐
BL21（DE3） Chemically Competent Cell/感受态系列试剂/高效表达感受态，转化效率＞10^8 cfu/μg/擎科生物TSINGKE
￥300
Tstbl3 Chemically Competent Cell/感受态系列/快速转化、免复苏，转化效率＞10^9 cfu/μg，抑制长片段末端重组/擎科生物TSINGKE
￥258
TSurbo Chemically Competent Cell/5小时极速生长，T1噬菌体抗性，转化效率＞10^9 cfu/μg，高质粒得率/感受态系列/擎科生物TSINGKE
￥268
TSBL21（DE3）pLysS Chemically Competent Cell/感受态系列/低本底高效表达感受态，转化效率＞10^8 cfu/μg，可用于毒性蛋白的表达/擎科生物TSINGKE
￥300
TSsetta（DE3）Chemically Competent Cell/感受态细胞/高效表达感受态，转化效率＞10^8 cfu/μg，含有稀有密码子tRNA，可表达含有稀有密码子的基因/擎科生物TSINGKE
￥300
相关问答
