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低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。
2、在体系中加一点切载体 的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体 自连，应该可以大大提高平端连接的效率。
3、足够多的载体和插入片段是最重要的 。
我认为也不一定，要看片段具体情况而言，有时载体和片段浓度过高，容易产生线性化产物，不利于环化的。
4、平端的连接对于离子浓度很敏感
回收的时候多洗洗
我做了几次都很顺的
加PEG和扩大酶量
22度2小时后4C过夜
5、尽可能缩小连接反应的体积，最好不超过10微升，在5、6微升左右最佳。
6、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14度好
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