互联网
1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好，平端连接需要过夜反应。
2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。
足够多的载体和插入片段是最重要的 。要看片段具体情况而言，有时载体和片段浓度过高，容易产生线性化产物，不利于环化的。插入的DNA的摩尔数是载体摩尔数的5-10倍，这个很关键。载体通常50ng就够了，若载体在10k左右，可用50－100ng。
3、平端的连接对于离子浓度很敏感，回收的时候多洗洗，加PEG和扩大酶量，22度2小时后4℃过夜。
4、尽可能缩小连接反应的体积，最好不超过10微升，在5、6微升左右最佳。
5、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14度好。
相关产品推荐
BL21（DE3） Chemically Competent Cell/感受态系列试剂/高效表达感受态，转化效率＞10^8 cfu/μg/擎科生物TSINGKE
￥300
JM109 Chemically Competent Cell/感受态系列/更利于克隆DNA的稳定及高纯度质粒DNA的提取，转化效率＞5×10^9 cfu/μg/擎科生物TSINGKE
￥199
TSBL21（DE3）pLysS Chemically Competent Cell/感受态系列/低本底高效表达感受态，转化效率＞10^8 cfu/μg，可用于毒性蛋白的表达/擎科生物TSINGKE
￥300
TSurbo Chemically Competent Cell/5小时极速生长，T1噬菌体抗性，转化效率＞10^9 cfu/μg，高质粒得率/感受态系列/擎科生物TSINGKE
￥268
Tstbl3 Chemically Competent Cell/感受态系列/快速转化、免复苏，转化效率＞10^9 cfu/μg，抑制长片段末端重组/擎科生物TSINGKE
￥258
