T4多核苷酸激酶末端标记

 

用 T4 标记的 5’ 末端

1． 无菌的 1.5ml 为了离心管置冰浴上顺序混合下列组分：

50 pmol 合成的寡核苷酸

2.5 μ l 10 ×反应缓冲液

10 μ l γ -[³² P]ATP （ 33pmol ）

1.5 μ l T4 多核苷酸激酶（ 15U ）

灭菌双蒸水加至 25 μ l

2． 37 ℃温育 30min 。

3． 当反应物正温育时，以 2000 × g 离心 2min 制备 Sephadex G-25 自旋柱。

4． 加入 2 μ l 0.5mol/L EDTA 或加热至 68 ℃ 10min 终止反应。将反应混合物装至自旋柱并于 2000 × g 离心 4min 。 1 μ l 柱洗脱液用液闪计数仪计数。