应用激酶交换反应的末端标记

应用激酶交换反应的末端标记

 

1． 在置冰浴中的 1.5ml 微量离心管内依次加入：

50 pmol 合成寡核苷酸

2.5 μ l 10 ×反应缓冲液

1.5 μ l ADP （ 300 μ mol/L 终浓度）

10 μ l γ－ [³² P]ATP （ 33pmol ）

1.5 μ l T4 多核苷酸激酶（ 15U ）

蒸馏水加至 25 μ l

2． 37 ℃水浴温育 30 分钟。

3． 加入 2 μ l 0.5mol/L EDTA 或加热至 68 ℃ 10min 终止反应。混合液经 Sephadex G-25 自旋转，离心（ 2000 × g ， 4min ），去除未掺入的核苷酸。用液闪计数计数 1 μ l 柱洗脱液。