电泳洗脱法回收酶切DNA片段
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(1)用合适的酶切割DNA并电泳。
(2)于紫外灯下从凝胶上切下所要的DNA带,装入含1×TBE缓冲液的透析代内,用夹子封好袋口,并检查有无漏孔。
(3)将透析袋(纵长)与两极间的边线垂直放于电泳槽内电泳,4~5V/cm电泳至DNA贴紧袋壁。
(4)取出透析袋,挤出凝胶块,吸出袋内液体放入1.5ml的离心管内,10000rpm离心5min。
(5)吸出上清放入离心管内,加入等体积的饱和酚和等体积的氯仿,振荡混匀,10000rpm离心5min,吸出上清放入新的离心管内。
(6)加入1/10体积的3mol/L AaAc,2倍体积预冷的无水乙醇,于-20℃放置4~5h。
(7)于4℃,10000rpm离心15min,弃上清。
(8)用75%的酒精洗涤2次,每次均于4℃,10000rpm离心5min,弃上清。
(9)真空抽干,并用适量1×TE溶解沉淀。如此即得所需DNA片段。
(2)于紫外灯下从凝胶上切下所要的DNA带,装入含1×TBE缓冲液的透析代内,用夹子封好袋口,并检查有无漏孔。
(3)将透析袋(纵长)与两极间的边线垂直放于电泳槽内电泳,4~5V/cm电泳至DNA贴紧袋壁。
(4)取出透析袋,挤出凝胶块,吸出袋内液体放入1.5ml的离心管内,10000rpm离心5min。
(5)吸出上清放入离心管内,加入等体积的饱和酚和等体积的氯仿,振荡混匀,10000rpm离心5min,吸出上清放入新的离心管内。
(6)加入1/10体积的3mol/L AaAc,2倍体积预冷的无水乙醇,于-20℃放置4~5h。
(7)于4℃,10000rpm离心15min,弃上清。
(8)用75%的酒精洗涤2次,每次均于4℃,10000rpm离心5min,弃上清。
(9)真空抽干,并用适量1×TE溶解沉淀。如此即得所需DNA片段。