材料与仪器
细胞
洗脱离心机 培养基 锥形瓶 洗脱仪
洗脱离心机 培养基 锥形瓶 洗脱仪
步骤
1. 准备下列仪器：
洗脱离心机
装有一个大容器中的 20 L 培养基，含 0.5%~1% 血清和抗生素，置于室温
20 个 1 L 的锥形瓶，用以收集各洗脱组分
2. 至少提前 10 天开始培养细胞，进行离心洗脱时细胞连续进入指数生长期且不会达到太大的饱和度。
3. 按洗脱仪提供的说明，安装转头和离心机，加入去离心水启动整个系统。
4. 细胞装在 1 L 的瓶子中，600 g，离心 25 分钟。
5. 倒尽上清，合并所有的细胞沉淀至一支 50 ml 规格的管中，终体积 40~50 ml。
6. 将上述浓缩的细胞悬液通过一支装有 18# 针头的注射器，打散细胞团块。
7. 显微镜检查细胞，如果有必要，用更小的针头重复处理直至大于 95% 的是单细胞。
8. 往洗脱系统中泵入含 0.5%~1% FCS 的培养基。
9. 参考洗脱仪附带的说明进行适当的细胞注入操作。
10. 首先分离个体小的 G1 期细胞，慢慢提高流速。
11. 当细胞室内看起来似乎没有什么细胞时，停止转头，维持流速，洗脱出残余的细胞。
12. 一边洗脱，一边用 Channelyzer 计数细胞和测量细胞大小。洗脱完毕，有必要分析各组细胞所位于的细胞周期的哪一阶段。
洗脱离心机
装有一个大容器中的 20 L 培养基，含 0.5%~1% 血清和抗生素，置于室温
20 个 1 L 的锥形瓶，用以收集各洗脱组分
2. 至少提前 10 天开始培养细胞，进行离心洗脱时细胞连续进入指数生长期且不会达到太大的饱和度。
3. 按洗脱仪提供的说明，安装转头和离心机，加入去离心水启动整个系统。
4. 细胞装在 1 L 的瓶子中，600 g，离心 25 分钟。
5. 倒尽上清，合并所有的细胞沉淀至一支 50 ml 规格的管中，终体积 40~50 ml。
6. 将上述浓缩的细胞悬液通过一支装有 18# 针头的注射器，打散细胞团块。
7. 显微镜检查细胞，如果有必要，用更小的针头重复处理直至大于 95% 的是单细胞。
8. 往洗脱系统中泵入含 0.5%~1% FCS 的培养基。
9. 参考洗脱仪附带的说明进行适当的细胞注入操作。
10. 首先分离个体小的 G1 期细胞，慢慢提高流速。
11. 当细胞室内看起来似乎没有什么细胞时，停止转头，维持流速，洗脱出残余的细胞。
12. 一边洗脱，一边用 Channelyzer 计数细胞和测量细胞大小。洗脱完毕，有必要分析各组细胞所位于的细胞周期的哪一阶段。
来源：丁香实验
